1 то лада гранта 8 клапанная: Что делают на 1 ТО Лада Гранта: перечень работ

Содержание

Лада Гранта — ТО на 15 тыс. км пробега — журнал За рулем

Двигатель и его системы
Проверка отсутствия посторонних стуков и шумов на работающем двигателе
Проверка токсичности отработавших газов
Замена масла и масляного фильтра
Проверка герметичности систем охлаждения, питания и выпуска отработавших газов. Оценка состояния шлангов, трубопроводов, соединений
Проверка состояния ремня привода генератора
Проверка состояния ремня привода вспомогательных агрегатов и замена при необходимости
Проверка состояния ремня привода ГРМ 16-клапанного двигателя и замена при необходимости
Проверка состояния ремня привода ГРМ 8-клапанного двигателя
Проверка работоспособности системы управления двигателем
Трансмиссия
Проверка хода педали сцепления и четкости переключения передач
Проверка отсутствия посторонних стуков и шумов при работе сцепления, коробки передач, приводов передних колес
Проверка уровня масла в коробке передач и герметичности агрегата
Проверка состояния защитных чехлов и шарниров приводов передних колес, тяги управления коробкой передач и реактивной тяги коробки передач
Ходовая часть
Проверка состояния элементов передней и задней подвесок
Рулевое управление
Проверка исправности механизма регулировки рулевой колонки по углу наклона
Проверка суммарного люфта рулевого управления
Проверка состояния шарниров наконечников рулевых тяг, их чехлов и чехла рулевого механизма
Проверка отсутствия посторонних стуков и шумов в рулевом механизме
Проверка исправности электроусилителя рулевого управления
Регулировка зазора в зацеплении «шестерня — рейка»
Тормозная система
Проверка исправности сигнального устройства уровня жидкости в бачке, герметичности гидропривода, состояния шлангов и трубок тормозной системы
Проверка исправности устройства фиксации рычага стояночного тормоза
Проверка состояния колодок, чехлов и наличия смазки направляющих пальцев тормозных механизмов передних колес
Проверка состояния колодок и пыльников колесных цилиндров тормозных механизмов задних колес
Проверка состояния тросов и регулировка стояночной тормозной системы
Проверка исправности вакуумного усилителя тормозов, регулятора давления в тормозных механизмах задних колес, положения выключателя сигналов торможения
Электрооборудование
Проверка отсутствия следов замыканий и видимых повреждений изоляции проводов
Проверка работоспособности элементов электрооборудования: генератора, стартера, световой сигнализации, освещения, контрольных приборов, очистителя и омывателя ветрового стекла, отопителя, обогрева заднего стекла, регулятора направления пучков света фар, электроприводов стеклоподъемников, электроблокировки замков дверей
Проверка уровня и плотности электролита аккумуляторной батареи
Проверка надежности крепления клемм проводов аккумуляторной батареи, зачистка клемм проводов и выводов батареи, нанесение на них смазки
Регулировка фар
Кузов
Проверка лакокрасочного покрытия кузова на наличие сколов, трещин и очагов коррозии, арок колес и днища на наличие повреждения мастики
Замена фильтрующего элемента системы отопления и вентиляции, прочистка дренажного отверстия водоотводящего короба
Проверка работоспособности замков дверей, капота, крышки багажника, крышки лючка заливной горловины топливного бака, механизмов сидений и ремней безопасности
Проверка состояния болтовых соединений системы кондиционирования воздуха
Проверка работоспособности системы кондиционирования воздуха

Лада Гранта — техническое обслуживание — журнал За рулем

Наименование операции Пробег автомобиля, тыс. км (годы эксплуатации)
2,5 15 (1) 30 (2) 45 (3) 60 (4) 75 (5) 90 (6) 105 (7)
Двигатель и его системы
Проверка отсутствия посторонних стуков и шумов на работающем двигателе + + + + + + + +
Подтяжка креплений деталей, узлов и агрегатов двигателя +  — +  — +  — +  —
Проверка и регулировка тепловых зазоров в приводе ГРМ 8-клапанного двигателя +  —  — +  —  — +  —
Проверка токсичности отработавших газов + + + + + + + +
Замена масла и масляного фильтра + + + + + + + +
Проверка герметичности систем охлаждения, питания и выпуска отработавших газов. Оценка состояния шлангов, трубопроводов, соединений  — + + + + + + +
Проверка состояния ремня привода генератора + +  — +  — +  — +
Замена ремня привода генератора + + +
Проверка состояния ремня привода вспомогательных агрегатов и замена при необходимости + + + + + + + +
Проверка состояния ремня привода ГРМ 16-клапанного двигателя и замена при необходимости + + + + + + +
Проверка состояния ремня привода ГРМ 8-клапанного двигателя + + + + + +
Замена ремня привода ГРМ 8-клапанного двигателя  —  —  —  —  — +  —  —
Замена сменного элемента воздушного фильтра  —  — +  — +  — +  —
Замена свечей зажигания  —  — +  — +  — +  —
Замена топливного фильтра  —  — +  — +  — +  —
Замена охлаждающей жидкости*  —  —  —  —  — +  —  —
Замена датчиков концентрации кислорода  —  —  —  —  — +  —  —
Проверка работоспособности системы управления двигателем + + + + + + + +
Трансмиссия
Проверка хода педали сцепления и четкости переключения передач + + + + + + + +
Проверка отсутствия посторонних стуков и шумов при работе сцепления, коробки передач, приводов передних колес + + + + + + + +
Подтяжка креплений узлов и агрегатов трансмиссии +  — +  — +  — +  —
Проверка уровня масла в коробке передач и герметичности агрегата  — + + + +  — + +
Замена масла в коробке передач  —  —  —  —  — +  —  —
Проверка состояния защитных чехлов и шарниров приводов передних колес, тяги управления коробкой передач и реактивной тяги коробки передач  — + + + + + + +
Ходовая часть
Подтяжка креплений элементов передней и задней подвесок +  — +  — +  — +  —
Проверка углов установки передних колес +  — +  — +  — +  —
Проверка состояния элементов передней и задней подвесок  — + + + + + + +
Проверка состояния дисков и шин, перестановка колес по схеме  —  — +  — +  — +  —
Рулевое управление
Проверка исправности механизма регулировки рулевой колонки по углу наклона + + + + + + + +
Проверка суммарного люфта рулевого управления  — + + + + + + +
Проверка состояния шарниров наконечников рулевых тяг, их чехлов и чехла рулевого механизма  — + + + + + + +
Проверка отсутствия посторонних стуков и шумов в рулевом механизме + + + + + + + +
Проверка исправности электроусилителя рулевого управления + + + + + + + +
Регулировка зазора в зацеплении «шестерня — рейка»  — +  —  —  —  —  —  —
Тормозная система
Проверка исправности сигнального устройства уровня жидкости в бачке, герметичности гидропривода, состояние шлангов и трубок тормозной системы + + + + + + + +
Проверка исправности устройства фиксации рычага стояночного тормоза + + + + + + + +
Проверка состояния колодок, чехлов и наличия смазки направляющих пальцев тормозных механизмов передних колес  — + + + + + + +
Проверка состояния колодок и пыльников колесных цилиндров тормозных механизмов задних колес  — + + + + + + +
Проверка состояния тросов и регулировка стояночной тормозной системы  — + + + + + + +
Проверка исправности вакуумного усилителя тормозов, регулятора давления в тормозных механизмах задних колес, положения выключателя сигналов торможения + + + + + + + +
Замена тормозной жидкости**  —  —  — +  —  — +  —
Электрооборудование
Проверка работоспособности ламп наружного и внутреннего освещения  — + + + + + + +
Проверка работоспособности элементов электрооборудования: генератора, стартера, световой и звуковой сигнализации, контрольных приборов, очистителя и омывателя ветрового стекла, отопителя, обогрева заднего стекла, регулятора направления пучков света фар, электроприводов стеклоподъемников, электроблокировки замков дверей  — + + + + + + +
Проверка уровня и плотности электролита аккумуляторной батареи  — + + + + + + +
Проверка надежности крепления клемм проводов аккумуляторной батареи, зачистка клемм проводов и выводов батареи, нанесение на них смазки  —  — +  — +  — +  —
Регулировка фар + + + + + + + +
Кузов
Проверка лакокрасочного покрытия кузова на наличие сколов, трещин и очагов коррозии, арок колес и днища на наличие повреждения мастики + + + + + + + +
Замена фильтрующего элемента системы отопления и вентиляции, прочистка дренажного отверстия водоотводящего короба  — + + + + + + +
Проверка работоспособности замков дверей, капота, крышки багажника, крышки лючка заливной горловины топливного бака, механизмов сидений и ремней безопасности  — + + + + + + +
Смазка цилиндровых механизмов замков дверей и крышки багажника, поверхностей трения ограничителей и петель дверей, шарниров и пружины крышки лючка заливной горловины топливного бака  —  — +  — +  — +  —
Проверка состояния болтовых соединений системы кондиционирования воздуха + + + + + + + +
Проверка работоспособности системы кондиционирования воздуха  — + + +  — + + +
Замена ресивера системы кондиционирования воздуха  —  —  —  — +  —  —  —

Лада Гранта 8 клапанный двигатель, характеристики, динамика, расход топлива

Двигатель Лады Гранты 8 клапанный объемом 1.6 литра на сегодняшний момент является самым популярным среди покупателей бюджетного седана. Конструкция мотора хорошо известна не только в официальном сервисе, но и в любом гараже. Поэтому ремонт и обслуживание данного мотора не вызывает трудностей и стоит относительно недорого. Сегодня подробнее поговорим о данном движке подробнее.

Бензиновый силовой агрегат Lada Granta ВАЗ-11186 мощностью 87 л.с. рабочим объемом 1.6 литра пришел на смену инжекторному движку ВАЗ-11183 развивающему 82 лошадиные силы. Повысить мощность и эффективность силового агрегата удалось новой облегченной поршневой группе от Federal Mogul. Конечно мотор не отличается фееричной динамикой и низким расходом топлива, но его относительно простая конструкция и ремонтопригодность позволяет говорить о неплохом варианте для наших суровых условий эксплуатации.

Что касается устройства технической части, то в основе чугунный блок цилиндров, алюминиевая головка, алюминиевая крышка ГБЦ, стальной поддон картера двигателя. В приводе ГРМ Лада Гранта 8-кл. стоит ремень. Восьмиклапанный механизм ГРМ не имеет гидрокомпенсаторов, регулировка клапанов происходит редко, но процесс довольно кропотливый. Необходимо подбирать «пятаки» разной толщины и укладывать их между кулачками распредвала и днищами стаканов-толкателей. Первый раз такую процедуру проводят на так называемом «0» нулевом ТО, после 3000 км пробега.

Извечный вопрос гнет ли клапана на двигателе Гранта ВАЗ-11186 при обрыве ремня ГРМ? Ответ однозначный, при обрыве ремня клапана гнет! В качестве пары к мотору прилагается 5-ступенчатая механическая коробка передач, других вариантов не предусмотрено.

Далее технические характеристики базового двигателя Lada Granta 8 клапанов 87 л.с.

Двигатель Лада Гранта 1.6 (87 л.с.), расход топлива, динамика

  • Рабочий объем — 1597 см3
  • Количество цилиндров/клапанов — 4/8
  • Привод ГРМ — ремень
  • Диаметр цилиндра — 82 мм
  • Ход поршня — 75,6 мм
  • Мощность л.с./кВт — 87/64 при 5100 оборотах в минуту
  • Крутящий момент — 140 Нм при 3800 оборотах в минуту
  • Максимальная скорость — 167 километров в час
  • Разгон до первой сотни — 12.2 секунд
  • Расход топлива по городу — 9.0 литра
  • Расход топлива в смешанном цикле — 6,6 литра
  • Расход топлива по трассе — 5,8 литра

В качестве топлива производитель рекомендует бензин марки АИ-95.

Схема ГРМ Лада Гранта 8 клапанов

  • 1 — зубчатый шкив коленчатого вала
  • 2 — зубчатый шкив насоса охлаждающей жидкости
  • 3 — натяжной ролик
  • 4 — задняя защитная крышка
  • 5 — зубчатый шкив распределительного вала
  • 6 — зубчатый ремень ГРМ
  • А — прилив на задней защитной крышке
  • В — метка на шкиве распределительного вала
  • С — метка на крышке масляного насоса
  • D — метка на шкиве коленчатого вала.

Еще одной особенностью мотора можно назвать расположение водяного насоса (помпы), который вращается все тем же ремнем ГРМ. То есть, в случае подтеканий охлаждающей жидкости или характерного шума/свиста/гула в районе привода ГРМ проверка ремня обязательна. Если подшипник помпы рассыпется и ремень слетит, то кроме замены корпуса водяного насоса и ремня придется перебирать еще и головку блока цилиндров, вынимая оттуда гнутые клапана.

В качестве оригинального ремня на «Автовазе» ставят очень надежный ремень компании Gates. Зачастую ресурс ремня Гейтс гораздо выше, чем ресурс помпы и натяжного ролика двигателя Лада Гранта 8 клапанов.

Лада Гранта двигатель | Масло в двигатель Лада Гранта тюнинг

Описание Лады Гранты

Lada Granta — удешевленный вариант Калины, вышедший в 2011 году. Изначально этот автомобиль позиционировался как замена заднеприводной классики, а также серии Самара 2 (2113, 2114, 2115). От Калины, база которой была использована, Гранта отличается немного измененным внешним видом и более бедными комплектациями. Сделано это для более плотного покрытия рынка максимально доступных автомобилей. В модельном ряде АвтоВАЗ, Гранта занимает место под Приорой и Вестой.

На рынке Гранта конкурирует с Renault Logan, дешевыми комплектациями Hyundai Solaris, KIA Rio, Skoda Fabia и прочими автомобилями европейского класса В в базовой комплектации.

Двигатели Лада Гранта 1,6 литровые, бюджетные варианты 8 клапанные. На таких версиях использованы две модификации: с легкой поршневой (помощнее, мотор 11186) и со старой тяжелой (слабее, 11183). Модели Гранты подороже шли со 106 л.с. (127 мотор) и 98 л.с. (126 мотор), 16 клапанными, от Приоры. Топовый двигатель Гранта ставился на наиболее дорогую и быструю модель — Granta Sport. Это приоровский двигатель с некоторыми доработками, позволившие ему поднять отдачу до 120 л.с. и придать автомобильчику некоторую динамику.

Какой двигатель на Лада Гранта выбрать? Все эти вышеперечисленные силовые установки давно на виду, они известны, по ним собрана масса интересной и содержательной информации. Здесь вы узнаете каков их ресурс, основные неисправности, характеристики двигателя Лада Гранта и какой двигатель лучше, конечно же правильный тюнинг без потери ресурса. А также какое масло в двигатель Гранта лить, сколько заливать, температура движка, ремонт, при возникновении основных проблем и прочее. 

Модель Лада Гранта:

1 поколение (2011 — н.в.):
Лада Гранта (81 л.с.) — 1,6i л.

Лада Гранта (87 л.с.) — 1,6i л.
Лада Гранта (126 мотор) (98 л.с.) — 16V 1,6i л.
Лада Гранта (127 мотор) (106 л.с.) — 16V 1,6i л.
Лада Гранта Спорт (126-77 мотор) (118 л.с.) — 16V 1.6i л.

<<НАЗАД

Где находится номер двигателя на Лада Гранта 8 и 16 клапанов

Автолюбители отечественных авто нередко задаются вопросом нахождения номера мотора Лады Гранта различных модификаций. Это связано с необходимостью перепродажи или постановки транспорта на учет – требуется проверить легальность установки двигателя.



Большинство владельцев не знают о месте расположения цифр и впадают в ступор при подобном вопросе. Тем более, когда речь заходит о VIN-номере. Страхи автомобилистов не оправданы – отдельные модификации и комплектации машин оборудованы схожими двигателями и места маркировки у них совпадают.

Мотор 82 л с (маркировка – 11183-50) 1 6 бензин 8 клапанов – номер



На фото выше показано место нанесения буквой «В». Здесь находится шифр, говорящий о модели и порядковом номере силовой установки. Для облегчения считывания информации производитель рекомендует использовать маленькое зеркало.

Где смотреть номер двигателя Гранты с маркировкой 11186 — 87 л с 8 кл

Подобный агрегат крайне популярен среди автомобилистов и поставлялся на машины с 2011-2012 по 2019 год включительно. Версии кузова типа седан или лифтбек не влияли на ДВС.

Маркировка наносится под термостатом путем выбивания металла. Технология гарантирует сохранность индекса при самых тяжелых условиях эксплуатации.

Номер мотора Granta (маркировка – 21126) 1 6 л 98 л с инжектор 16 клапанов

На Гранте типа лифтбек с инжекторным впрыском место нанесения маркировки на установку не поменялось. Машина выпускалась в период 2015-2019 годов и поставлялась с коробкой автомат и механикой.

Отдельно следует подчеркнуть, что на некоторых версиях номер пишется на специальной площадке между третьим и вторым цилиндром. Для возможности нормального считывания информации, производитель рекомендует предварительно очистить панель специальными средствами и щеткой по металлу. Суть в том, что участок моторного отсека подвержен образованию накипи и грязи.

Номер двигателя (21127) 1 6 литра 106 л с: 16 кл – где находится

На инжекторном 16 клапаннике, поставляемом с 2015 года, шильдик с маркировкой монтируется в стандартом месте. Производитель решил не изменять традициям и разместил номер под термостатом. Подобная конфигурация наблюдается и на машинах 2016-2019 годов.

Подобная стабильность достигается тем, что блок двигателя, по сути, не претерпевает изменений. Основные отличия заключаются в навесном оборудовании.

Заржавел и не читается номер двигателя Гранты

Некоторые пользователи сталкиваются с тем, что во время осмотра обнаруживаются ржавые пятна на месте нанесения маркировки. Достаточно распространенная проблема легко решается. Чтобы почистить блок достаточно выполнить процедуру.

  1. Тряпкой или специальной щеткой убрать рыхлую грязь с поверхности металла.
  2. Далее обработать панель специальными средствами. Обычно используется керосин, дизельное топливо или ингибитор коррозии. Средство следует наносить аккуратно, чтобы не повредить пластиковые и полимерные детали двигателя.
  3. Подождав, когда грязь откиснет, нужно с усилием почистить место щеткой по металлу. Можно действовать смело и не бояться повредить надпись. Заводская шифровка наносится ударным методом и не боится подобных действий.
  4. После грубой очистки можно протереть все сухой, чистой ветошью и обработать антикоррозийными средствами.

Отличается ли расположение на Гранте Спорт

В заряженной версии устанавливается идентичный блок двигателя, изменяется только навесное оборудование. Расположение кодов и маркировок изготовителя будет аналогично обычным модификациям автомобиля.

Расшифровка кода VIN 2112

На модели присутствует стандартный ВИН номер кузова. Маркировка расшифровывается следующим образом.

  1. Первые три символа указывают на континент, страну и конкретного производителя – фирму.
  2. Следующим идет указатель модели машины, состоящий из шести цифр.
  3. Далее наносится год выпуска автомобиля. Это может быть латинская или греческая цифра.
  4. Последним идет указатель серийного номера кузова. Это очередность на конвейере.

Итог

Определить номер агрегата Гранты просто, при знании конструкции машины. Маркировка наносится надежным способом и отлично держится весь срок службы машины.

Автор: Думанов Борис

Специализация: Закончил государственный автомобильный университет, проработал 20 лет на ГАЗ-56, сейчас езжу на жигулях.

Подробнее об авторе Калькулятор — помощник для расчета стоимости, удорожания автокредита на покупку автомобиля

Оставить отзыв

Экран двигателя для 8-клапанного двигателя 1,6л Лада Гранта, Калина, Приора, Датсун (без эмблемы, без крепежа)

**********************************************
Друзья! Все заявки принимаются ТОЛЬКО ЧЕРЕЗ КОРЗИНУ нашего магазина.
Внешний вид товара, включая цвет, могут отличаться от представленных на фотографии. Смотрите описание товара.
Как нас найти — смотрите здесь
**********************************************

Экран двигателя для 8-клапанного двигателя 1,6л Лада Гранта, Калина, Приора, Датсун (Без эмблемы, Без крепежа)

Артикул: 2111-1008650

В комплекте: экран двигателя — 1 шт
Цена: за 1 шт.

Экран двигателя для 8-клапанных инжекторных двигателей Лада Гранта, Приора, Калина.

Это декоративный пластиковых кожух двигателя, который защитит ДВС от пыли и грязи и придаст привлекательный вид в подкапотном пространстве.

 
Для установки экрана на двигатель Гранта, Калина и Датсун 11186 и 21116 потребуется доработка:

1. Открутить глухие гайки крепления клапанной крышки и произвести замену на гайки М6.

2. На резьбу шпилек клапанной крышки накрутить удлиненные гайки М6.
3. Закрутить в удлиненные гайки шпильки М6.
4. Напильником подрезать овальный вырез экрана в районе кожуха ремня ГРМ для плотного прилегания экрана к кожуху.
5. Установить экран на шпильки.

Пример установки в бортжурнале.

Общие характеристики
Автомобиль Lada Granta,Lada Kalina,Lada Priora,DATSUN On-Do
Тип товара Защитные накладки,Аксессуар
Материал Пластик
Расположение Кузов,Капот,Двигатель

Обрыв ремня ГРМ на гранте 8 клапанной. Какой лад гранты гнет клапана как узнать

Перед покупкой или после, но рано или поздно владельцев нового АвтоВАЗа начнет волновать вопрос: «Гнёт ли клапан на Lada Granta при обрыве ремня?». И автомобилисты небезосновательно озадачены этой проблемой, ведь предыдущие модели часто грешили этим крайне неприятным дефектом. При обрыве ремня ГРМ загибались клапана особенно на 16-клапанных двигателях «двенашек» и приоров.

Как известно, основой Лады Гранты является Лада Калина вместе с ее надежными двигателями и негнущимися клапанами. Но, к сожалению, вздохнуть спокойно могут только владельцы Lada Grant в комплектации «Стандарт». Но Лада Гранта «Норма» оснащена восьмиклапанным двигателем с облегченным шатунно-поршневым механизмом, и в таком двигателе при обрыве ремня ГРМ клапану непременно грозит гибельная встреча с поршнями. Ремонта после таких столкновений, конечно же, не избежать.Кажется странным — практически одинаковые по характеристикам двигатели имеют разную конструкцию. Но все объясняется тем, что на стандартных 8-клапанных двигателях поршни имеют выемки под клапаны и при обрыве ремня их не возникает. Но те же двигатели, но с облегченной шатунно-поршневой группой, оснащены укороченными поршнями, в которых просто нет места для выемок. Поэтому обрыв ремня ГРМ непременно приведет к загибу клапанов.

Такая же проблема у двигателей Лада Приора, хотя у них ремень достаточно широкий и вероятность обрыва сведена к минимуму.Большой опыт эксплуатации данного автомобиля показал, что обрыв ремня ГРМ происходит крайне редко, и то при трогании с места на буксире или с толкача, что в принципе делать категорически запрещено, т.к. при запуске двигателя в этом случае нагрузка на распредвале слишком высоко и ремень перескакивает на несколько резцов, что приводит к печальным результатам.

Как бы то ни было, автомобилист обязан следить за состоянием ремня ГРМ даже в том случае, если на поршнях есть углубления для клапанов.Профилактика еще никому не вредила, а ремонтировать все это дело где-нибудь на трассе занятие не из приятных.

Проблема обрыва ремня ГРМ и последующего повреждения клапанов была знакома многим владельцам Лада Калина. Усовершенствованная Гранта, по мнению многих покупателей, избавилась от этой проблемы.

Но все равно опасения на этот счет не проходят. Поэтому сначала рекомендуется выяснить, гнут ли клапана на Гранте 8 клапанной и 16 клапанной, и модели, с каким двигателем работа наиболее надежна.

На каких двигателях Гранта гнет клапана при обрыве ГРМ?

Нынешние владельцы Гранты утверждают, что не все 8-клапанные моторы проблемные. В частности, комплектация «Стандарт» оснащена действительно качественным силовым агрегатом и не принесет серьезного ущерба своему будущему владельцу.

Поломок не будет при своевременном осмотре и диагностике автомобиля. А вот для агрегата 11186 (ранее 21114) даже периодические проверки не всегда будут профилактической мерой.

Особенности двигателя 11186: пониженный шум при работе, низкий расход топлива и повышенная мощность. Но помимо достоинств модифицированный силовой агрегат получил и некоторые проблемные места: новую шатунно-поршневую систему. Основное его отличие — меньший вес, достигнутый за счет укорочения поршней. В результате уменьшенное пространство не позволило практично и безопасно разместить механизмы.

Почему 8-клапанный поворотный клапан Grant?

Не менее важна для изучения и сама процедура пробоя.Поняв, какие участки наиболее подвержены повреждениям, владелец сможет уделить им больше внимания или обратиться за помощью к специалистам.

После диагностики мастера проведут полное обслуживание и помогут избежать многочисленных причин обрыва ГРМ: заедания помпы, роликов, распредвала или коленвала. Процесс повреждения клапана происходит по следующей схеме:

1. Обрыв ремня ГРМ.

2. Распредвал останавливается.

3.Коленчатый вал продолжает вращаться (маховик передает вращение).

4. В момент поломки поршни ударяются об открытые клапаны.

Таким образом, погнулись клапана, и в дальнейшем их нужно будет полностью заменить. Также узнать, гнет ли клапана Лада Гранта 8 клапана, можно у специалистов, работающих на СТО.

Ведь поломка не обязательно касается каждого владельца. отечественный авто. Поломка возникает в исключительных случаях, когда автомобилист уделяет недостаточно времени обслуживанию автомобиля.Следовательно, первопричиной является недостаточно добросовестная эксплуатация.

В некоторых случаях помогает замена ремня на более прочный: заводской компонент может не соответствовать требуемой нагрузке и условиям эксплуатации. Сила натяжения должна полностью соответствовать заявленным рекомендациям производителей. Поэтому саморегуляция может только ухудшить ситуацию.

Также следует обращаться к специалистам при появлении первичных признаков, которые могут свидетельствовать о последующем обрыве ремня. Это может быть небольшой шум от привода ГРМ.Именно он укажет на возможный износ или частичный клин или помпу.

Все эти факторы являются решающими и могут привести к необходимости дорогостоящего ремонта, а в крайнем случае и к вызову эвакуатора, если водитель в момент поломки находился за городом. Владельцу Гранты необходимо учитывать все учтенные нюансы и решать малейшие проблемы сразу после их появления.

В конструкторском отделе двигателей Волжского автозавода выяснили, чем новый агрегат лучше предшественника и какие для этого потребовались переделки.

Модернизацию восьмиклапанного двигателя ВАЗ-21114 приблизили два крупных события: вывод Гранты на рынок и переход всего модельного ряда на следующую экологическую ступень — Евро-4. И хотя старый 1,6-литровый, несмотря на солидный возраст (его корни уходят в середину 80-х годов прошлого века), не выглядел дряхлым старичком, новые стандарты и веяния требовали масштабных изменений. При этом, как это часто бывает, пространство для маневра мотористов сузило финансовые рамки.

Поэтому пошли по уже проторенному пути. Ведь несколькими годами ранее обновление пережил 16-клапанный двигатель того же объема (ВАЗ-21126), на котором были опробованы некоторые технические решения. Причем унифицировать удалось не только подход, но и многие детали, например, шатун с вкладышами, поршневой палец и кольца. Блок цилиндров, хоть и со своим индексом, точно такой же, как у двигателя ВАЗ-21126: с дополнительными форсунками для охлаждения поршней маслом и пластинчатым хонингованием стенок цилиндров, что сокращает время обкатки.

Однако в точности скопировать все изменения не удалось: сложнее организовать рабочий процесс в моторе с двумя клапанами на цилиндр. Тем более, что требования к модернизированной восьмиклапаннице оказались более жесткими. Взять хотя бы ресурс — 160 тыс. км у ВАЗ-21126 и 200 тыс. км у ВАЗ-21116. Что было изменено и почему, расскажут фото с подписями.

Новый Н-модуль впуска испытан на промежуточной версии — двигателе ВАЗ-11183-50 (с коллектором Евро-4, но с тяжелой шатунно-поршневой группой).Даже без облегчения, только за счет оптимизации впуска и выпуска удалось улучшить основные характеристики.

Модернизированный агрегат получил более длинные каналы, что позволило увеличить крутящий момент, приблизившись к показателям шестнадцатиклапанника. В то же время у ВАЗ-21116 его пик достигался на 700–800 об/мин ниже. Еще одна важная особенность: на входе дроссельной заслонки ресивера теперь установлен электромеханический модуль (общепринятое название «е-газ»), а от педали акселератора к двигателю протянуты не трос, а провода.Таким образом, блок управления получил возможность полностью контролировать подачу не только бензина, но и воздуха в цилиндры. Это не только во благо экологии, но и в целях безопасности, ведь многие электронные помощники (их список на моделях ВАЗ скоро пополнится) удерживают машину на траектории, в том числе дозируя тягу.

Массы шатунно-поршневых групп двигателей ВАЗ-21114 (тяжелая ШПГ, указана в скобках) и ВАЗ-21116 (облегченная ШПГ).

В старом коллекторе с цилиндрическим блоком четыре канала, идущие от двигателя, сходились почти в одну точку — потоки выхлопных газов сталкивались, создавая дополнительное противодавление.

В модернизированном увеличена длина труб, а уплощенная форма блока позволила изменить схему их входа в «бочку»: потоки были разбавлены, соответственно снижены сопротивления и потери.

Стандарты компоновки и шума не позволяли сделать каналы еще длиннее: чем длиннее каналы, тем громче звук. Кроме того, чем дальше коллектор удален от двигателя, тем медленнее он прогревается и тем дольше работает.Результат: после запуска из выхлопной трубы выбрасывается больше вредных веществ.

Одним из самых трудоемких процессов был подбор поршня. Поначалу мотор хотели оставить «бесштыревым» (при обрыве ремня ГРМ клапана не гнут), поэтому первые поршни были с отверстиями на дне. Но от этой идеи отказались: из-за повышенной термической нагрузки в утоненных местах появились микротрещины, что сказалось на ресурсе. Так как в восьмиклапанном двигателе часть камеры сгорания находится в поршне (только так можно обеспечить нормальный процесс сгорания), то размер так называемого корыта (нем. Mulde — полость, корыто) был выбран — углубления в днище.

Из-за критической температуры в районе первого поршневого кольца пришлось ввести дополнительное анодирование канавки. Кстати, 16-клапанные моторы испытывают в этой зоне меньшие тепловые нагрузки и поэтому обходятся без дополнительной обработки.

Новый поршень имеет еще одно любопытное и очень важное для наших условий отличие. На юбку нанесено графитовое покрытие, снижающее вероятность задиров при холодном пуске. Не исключено, что ВАЗ-21116 разделит графитизацию с 16-клапанными агрегатами.

Показатели мощности и крутящего момента восьмиклапанных двигателей ВАЗ: 21114 — с относительно тяжелой ШПГ; 11183–50 — с тяжелой ШПГ, но с новыми входом и выходом; 21116 — полностью модернизированный.

Еще более масштабные изменения в головке блока. За счет видоизмененной камеры сгорания он вырос в высоту на 1,2 мм — такую ​​регулировку можно произвести без капитальной переналадки оборудования, работающего в заводских цехах.

С помощью компьютерного моделирования подобраны оптимальные проходные сечения газовых каналов, повышена их пропускная способность и снижены входные потери.Так как мощность была увеличена, двигатель стал более термически нагруженным, поэтому в технологический процесс пришлось включить дополнительную операцию — термическую обработку. Кстати, его проходят все 16-клапанные головки. Кроме того, ради более эффективного отвода тепла увеличено сечение каналов охлаждения, но только тех, которые действительно в этом нуждаются.

Повышена надежность газового стыка за счет введения двухслойной металлической прокладки: она обеспечивает более высокие удельные давления и герметичность при меньшем усилии затяжки.Это позволило уменьшить диаметр болтов, стягивающих головку и блок цилиндров (с М12 до М10). Плюсы не только в снижении веса и экономии металла: чем меньше момент затяжки, тем меньше деформируются цилиндры. Конечно, счет идет на микроны, но именно такие мелочи и влияют на надежность и ресурс.

Поскольку при обрыве ремня ГРМ на двигателе ВАЗ-21116 поршни встречаются с клапанами, одной из важных задач была разработка более надежного и долговечного привода.

Доверенный партнер Gates помог выбрать ремень. Серийный образец полностью соответствовал основным техническим условиям: работать при температуре от -40 до +45 ºС и не требовать замены в течение всего срока службы двигателя. Да-да, раньше 200 тыс. км его менять не придется! И затянуть тоже — об этом позаботится автоматический натяжитель.

Не только избавляет от лишней эксплуатации, но и обеспечивает правильное натяжение, что влияет на ресурс не в меньшей степени, чем на качество самого ремня.Если перетянуть, страдают подшипники роликов и водяной помпы. Последний, кстати, тоже модернизировали: установили более надежный подшипник и сальник, а также повысили производительность (узел от шестнадцатиклапанника, только со шкивом для узкого ремня).

Привод теперь защищен от механических повреждений закрытым пластиковым кожухом с герметичными уплотнениями.

Модернизация восьмиклапанного двигателя для переднеприводных моделей заняла два года. Основными целями были снижение расхода топлива и повышение динамических характеристик за счет снижения механических потерь двигателя, а попутно — снижения вредных вибраций и шума.И, конечно же, повышенная надежность. Стандарты Евро-4 требуют, чтобы двигатель сохранял исходные параметры выбросов в два раза дольше – до 160 тыс. км. А ресурс мы увеличили почти вдвое: со 120 тыс. до 200 тыс. км. Шатунно-поршневая группа ВАЗ-21116, как и шестнадцатиклапанная, покупная. В дальнейшем часть деталей мы планируем производить сами, а часть продолжим закупать у зарубежных партнеров из группы Federal Mogul, которые намерены локализовать производство комплектующих в России.Мы также учитываем интересы альянса Renault-Nissan. Если выпуск двигателей будет расти, то целесообразно закупить дополнительное оборудование и организовать производство деталей шатунно-поршневой группы в Тольятти.

.
Год выпуска : 2014.
спрашивает : Энтони Сопрано.
Суть вопроса : Купил Лада Гранта 16 клапанов, стоит ли менять ремень ГРМ, клапана не гнет?

Всем привет, купил с рук 16 клапанную Ладу Гранту.Она 2014 года, пробег 45000 км, предыдущий хозяин говорит ремень ГРМ еще не менял. Стоит ли менять ремень при таком пробеге? Не гнет ли двигатель клапана на моей Гранте в случае обрыва ремня ГРМ, например, при заклинивании помпы?

Клапан 16 на Гранту Клапан гнет

Следующие две вкладки изменяют содержимое ниже.

Эксперт по автомобилям Лада с многолетним стажем. Владею автомобилем Лада Гранта, собираю корч на базе Приоры.Иногда ночую в гараже. Моя жена больше ревнует к машинам, чем к женщинам.

16-клапанный двигатель гнет клапана!

Загнуты клапана после обрыва ремня ГРМ на Гранте

Все двигатели на Lada Granta гнут клапана, за исключением установленного двигателя. Этот двигатель имеет мощность 82 л.с., и Гранта унаследовала его от Калины.

Модель с 16-клапанным двигателем тоже не лишена этого недостатка. А может это плюс, такая архаичность?

Почему бы не сделать проточку в клапанах?

Казалось бы, пойти навстречу потребителю и сделать проточку в клапанах, но не все так просто.Особенно на 16 клапанном двигателе, который оснащен гидрокомпенсаторами и требует более сложных настроек.

Подробно о замене ремня ГРМ в статье: Замена ремня ГРМ своими руками на 16-клапанной Лада Гранта.

Серджио Маркионне сказал: «Сначала вам придется застрелить меня», когда его спросили о возможности выхода в сегмент внедорожников. Времена меняются, рынки развиваются, и итальянский производитель суперкаров подтвердил, что активно разрабатывает свою первую модель скоростного внедорожника.Он будет сильно отличаться от любого внедорожника на рынке.

Идея Ferrari о разработке внедорожников является спорной даже в глубине штаб-квартиры компании, но, пожалуй, самым гарантированным способом увеличения прибыли и привлечения новых клиентов. Porsche, Bentley, Lamborghini и Rolls-Royce уже вышли на арену, а к концу 2019 года к ним присоединился Aston Martin. Модель Ferrari не будет выпущена до 2022 года, поэтому компания опоздает в тренде. У этого подхода есть плюсы и минусы.Ferarri нужно приложить немало усилий, чтобы выделить свою модель, но она находится в идеальном положении, чтобы извлечь ценные уроки из своих конкурентов.

У внедорожника Ferrari пока нет имени, но внутри компании он именуется Purosangue, что в переводе с итальянского означает «чистокровный». Это говорит о многом. У него будут некоторые внедорожные функции, но по большей части он не предназначен для бездорожья. И как вы понимаете, это будет Феррари с нуля, а не переделанная версия существующей машины.Британский журнал Autocar узнал, что Purosangue будет построен на модульной платформе, предназначенной для поддержки автомобилей с передним и средним расположением двигателя, что необычно для сегмента внедорожников. Эта компоновка чаще всего ассоциируется с низкими спортивными автомобилями. Также ожидается полный набор электроники и другие дополнения. Технический директор Ferrari Майкл Лайтерс подчеркнул, что модель будет не похожа ни на что другое на рынке. Спецификации также пока недоступны и, скорее всего, еще не завершены.Ferrari обладает впечатляющей стабильностью благодаря выбору 8- и 12-цилиндровых двигателей. Неподтвержденные слухи также указывают на гибридную версию с подключаемым модулем, построенную на основе еще не раскрытого двигателя V6. Полный привод будет стандартным, как и автоматическая коробка передач.

Purosangue не станет первым четырехместным Ferrari , но станет одной из самых семейных моделей, когда-либо выпускавшихся компанией. Владельцы смогут кататься на нем каждый день круглый год. Поэтому будет удобно и водителю, и пассажиру.Инженеры полагаются на электронную магию (например, подвеску с электронной регулировкой). Внедорожник получит все функции, которые покупатели ожидают от современного роскошного автомобиля, такие как проекционный экран и современная информационно-развлекательная система.

Как подтянуть ГРМ гранта 8 клапанная. Особенности ремня ГРМ на ладу гранта

Уважаемые покупатели, во избежание ошибок при отправке подшипника натяжителя ремня, в строке «Комментарий» укажите модель Вашего автомобиля, год выпуска, количество клапанов.

На двигателях ВАЗ 21116 установлен привод газораспределительного механизма с натяжным роликом, благодаря чему нет необходимости проверять и регулировать натяжение ремня ГРМ, срок службы самого ремня значительно увеличивается.

Натяжной ролик 3, расположенный под шкивом распределительного вала 5. Предназначен для натяжения ремня ГРМ и удержания его в наиболее устойчивом положении на протяжении всего пробега. Причем речь здесь идет не только о среднем показателе, но и о колебаниях ремня, которые необходимо сглаживать.

1 — зубчатый шкив коленчатого вала; 2 — зубчатый шкив насоса охлаждающей жидкости; 3 — натяжной ролик; 4 — задняя крышка ремня ГРМ; 5 — зубчатый шкив распределительного вала; 6 — ремень ГРМ; 7 — прилив на крышке масляного насоса; А — метка на зубчатом шкиве коленчатого вала; Б — метка на приливе крышки масляного насоса;

С — выступ на задней крышке ремня ГРМ; D — метка на зубчатом шкиве распределительного вала.

У натяжного ролика ВАЗ 21116 установочное отверстие расположено эксцентрично (смещено от центра на 6 мм).Поэтому поворотом натяжного ролика относительно шпильки крепления регулируется натяжение ремня ГРМ.

Если при работающем двигателе вы слышите посторонний шум от ремня ГРМ, значит начал шуметь ролик натяжителя и его придется менять. Время от времени необходимо проверять состояние ремня ГРМ, если на нем появились трещины или ремень растянулся, то его тоже нужно менять.

При попадании масла на зубчатый ремень срок его службы значительно сократится.Выход из строя зубцов на ремне приведет к нарушению фаз газораспределения и, возможно, к серьезному повреждению двигателя. Обрыв ремня неизбежно приведет к остановке двигателя. Учитывая все это, на двигателях с автоматическим механизмом натяжения целесообразно проверить состояние ремня ГРМ, и при обнаружении на нем дефектов заменить.

При установке не допускайте резких изгибов зубчатого ремня радиусом менее 20 мм, чтобы не повредить шнур.

Другие артикулы товаров и их аналоги в каталогах: 21116100623800, Т-02233, КТ 100540.

ВАЗ 2190.

Любая поломка — это не конец света, а вполне решаемая проблема!

Причины выхода из строя подшипника натяжителя ремня ГРМ для автомобиля семейства ВАЗ.

Как самостоятельно заменить подшипник натяжителя ремня ГРМ на автомобиле семейства ВАЗ(8 В).

С Интернетом — Магазин Дискаунтер АвтоАзбука затраты на ремонт будут минимальными.

Просто СРАВНИТЕ и УБЕДИТЕСЬ!!!

Популярный двигатель ВАЗ 21116 (11186) также устанавливается на Lada Granta.Этому мотору звёзд с неба не хватает, но приятно, что его обслуживание и ремонт можно смело производить своими руками в условиях гаража. Однако у него есть несколько проблем, и они решаются тщательным и своевременным уходом. Замена ремня ГРМ на 8-клапанной Гранте своими руками не доставит никаких проблем, если менять ремень по технологии, не забывая о выборе качественного ремня.

Существует немало легенд о том, что будет, если обрывается ремень ГРМ при работающем двигателе.К сожалению, что касается двигателя ВАЗ 21116, то большинство из них недалеки от истины. Для этого двигателя обрыв ремня привода распредвала более чем критичен. Встреча поршней с клапанами, как правило, заканчивается не слишком радужно: погнутые клапана, порванные шатуны, пробитые блоки цилиндров и сломанные поршни – все это, действительно, может произойти, если вовремя не заменить ремень ГРМ.

Погнутые клапана в головке блока

Чтобы двигатель служил долго и надежно, достаточно просто осматривать приводной ремень каждые 10-15 тысяч пробега распредвал и при обнаружении тревожных симптомов не лениться и сразу поменять.Признаки того, что ремень просится в отставку, понятны даже чайнику:

  1. На поверхности ремня хорошо видны трещины, порезы, зазубрины и другие механические повреждения.
  2. Зубья могут быть повреждены или полностью срезаны.
  3. На ремне следы рабочих жидкостей — масла, бензина, антифриза, тормозной жидкости. Но прежде чем менять ремень, нужно найти и устранить причину утечки жидкости.
  4. Расслоение резинового материала.
  5. Растяжка ремня.

Следовательно, замену ремня в нормальных условиях, когда все остальные узлы и системы работают исправно и не вызывают нареканий, проводят через каждые 40-50 тыс. км , а проверку состояния ремня не реже каждые 10-15 тыс. км … В этом случае двигатель ВАЗ 21116 без проблем откатит свой ресурс в 180-200 тыс. до капитального ремонта.

Все то же самое относится и к двигателям с 8-клапанной головкой ВАЗ 11186, которые абсолютно идентичны ВАЗ 21116, но имеют цилиндропоршневую группу фирмы Federal Mogul.

Какой ремень лучше купить на Гранту и какой двигатель

С завода на все двигатели ВАЗ устанавливаются ремни фирмы Gates … Сменный комплект для 8-клапанных головок носит артикул K015670XS .. Мы достаточно подробно остановились на теме выбора лучших ремней ГРМ для двигателей ВАЗ и поэтому повторяться особого смысла нет. Там же можно узнать, как отличить подделку от качественного комплекта для замены ремня ГРМ, а также все необходимые статьи для поиска на местных сайтах по продаже запчастей ВАЗ.


Итало-китайская марка Trialli с артикулом GD 790 получила хорошие отзывы владельцев

Еще хорошие ремни. Который подходит на 8-клапанную Гранту

Что касается нашей Гранты, то сложность в выборе ремней для восьмиклапанного двигателя заключается в том, что на старые автомобили и на автомобили в штатной комплектации устанавливался древний, но надежный восьмиклапанный двигатель. ВАЗ 11183 , аналог ВАЗ 21083. Этот двигатель хорош тем, что клапана в нем не гнет при обрыве ремня. Для него нужно купить ремень с каталожным номером 2108-1006040-10 , и натяжной ролик 2108-1006120 .


Новый ремень Gates

Для двух других двигателей Гранты с 8-клапанным варочным блоком (это двигатели ВАЗ 11186 и ВАЗ 21116 ) покупаем следующие запчасти:

  • Ремень привода распредвала 21116-1006040 ;
  • натяжной ролик 21116-1006226 ;
  • при желании можно купить специальный ключ для удобства регулировки натяжения ремня 67.7812.9573-01 .

Ремень фирмы Continental

Конечно, для этого мотора есть аналоги других производителей и их очень много.Самые популярные:

  • GАTES — 5670XS, как оригинал, но в своей коробке;
  • Trialli GD 790, итальянская марка, китайская сборка;
  • CONTITECH — CT1164, отличный ремень от Continental, если не подделка;
  • КВАРЦ с каталожным номером QZ-5670XS, немецкие ремни хорошего качества;
  • INA 530053610, один из самых качественных и дорогих наборов;
  • DAYCO KTB944, красивый итальянский комплект;
  • Производственный комплект BOSCH 1987 948 286.

При этом важно, чтобы ремень соответствовал геометрическим параметрам — длина ремня 1305 мм, количество зубьев 113, ширина ремня 17 мм.

Замена ремня ГРМ на Гранте своими руками

Когда проверяем состояние ремня или собираемся его менять, то после поездки необходимо дать двигателю остыть. Оптимальная температура для замены около 20 градусов. По словам АвтоВАЗа, замена критически необходима на 75-й тысяче пробега, но, по словам водителей, менять нужно чаще. Для замены нам понадобится стандартный набор инструментов и специальный ключ для затяжки ролика.

Если все это есть, приступим к работе.

Механизм газораспределения – одна из важнейших систем двигателя внутреннего сгорания. Ремень ГРМ управляет клапанами двигателя, осуществляя нормальную работу впуска и выпуска.Во время впуска воздушно-топливная смесь поступает в камеры сгорания в результате открытия впускного клапана. На следующей фазе открывается выпускной клапан, и газораспределительный механизм удаляет выхлопные газы из камеры сгорания. На ВАЗ 2190 используется стандартный газораспределительный узел, который отличается только количеством клапанов двигателя.

Характеристики ГРМ Лада Гранта

Механизм газораспределения Лада Гранта имеет ременный привод. Подобное устройство давно знакомо автомобилистам.Ведь конструкция ГРМ перекочевала с двигателя ВАЗ 2108, ставшего базовым для всех последующих модификаций силовых установок ВАЗ. На Гранту устанавливаются два типа двигателей: 8-клапанный и 16-клапанный. Система газораспределения 16-клапанного силового агрегата имеет сложную конструкцию и увеличенные габариты по сравнению с 8-клапанным. Соответственно замена ремня ГРМ Гранты усложняется.

Главной особенностью 16-клапанного устройства является наличие двух распределительных валов, работающих синхронно, параллельно коленчатому валу.Конструкция расположена в головке блока цилиндров. Все три вала синхронизированы зубчатым ремнем. Основным недостатком ременной передачи ГРМ является ненадежность самого ремня. При его обрыве или при прыжке клапана встречаются с поршнями и гнутся. Устройство 16-клапанного ремня ГРМ наглядно показано на фото.

16-клапанный узел

  1. Метка совмещения на крышке привода.
  2. Крышка.
  3. Шкив впускного распределительного вала.
  4. Фазовый диск (датчик).
  5. Метка ВМТ
  6. на распредвале.
  7. Высвободить шкив распределительного вала.
  8. Опорный ролик.
  9. Ролик натяжителя.
  10. Приводной ремень.
  11. Шкив помпы (насос охлаждающей жидкости).
  12. Установочная метка на масляном насосе.
  13. Метка совмещения коленчатого вала.
  14. Шкив коленчатого вала.

Комплект ГРМ можно менять вручную. Главное знать о наличии и правильном размещении установочных меток. Кстати, большинство иномарок лишены таких меток, так что в данном случае преимущество за автомобилями ВАЗ.

Восьмиклапанный привод ГРМ Лады Гранты по сравнению с предыдущими модификациями автомобиля выглядит проще. Схема проста, потому что нет обводного ролика и есть только один распределительный вал. На фото хорошо видно устройство ГРМ на 8 клапанов.

Если вы сомневаетесь в собственных силах, не нужно пытаться заменить ремень ГРМ своими руками, так как можно еще больше навредить. Кроме того, в автосервисе такая процедура, выполненная на 8-клапанном двигателе, стоит недорого.А вот в случае с 16-клапанным мотором ценник обычно гораздо выше.

Замена ремня ГРМ на 16 клапанном двигателе Гранта

Доступ к приводу газораспределительного устройства закрыт пластиковой крышкой. Чтобы снять крышку, нужно открутить пять винтов шестигранным ключом на 5. Обратите особое внимание на расположение этих винтов. На фотографии под номером 1 показаны винты крепления верхней крышки, а под номером 2 — винты крепления нижней крышки. После откручивания пяти винтов верхнюю крышку необходимо приподнять и снять с двигателя.

Если на автомобиле механическая коробка передач, нужно включить пятую скорость, вывесить правое переднее колесо и повернуть его по часовой стрелке. При этом требуется осмотреть ремень на наличие трещин, потертостей, расслоений и т. д. Если автомобиль оборудован автоматической коробкой передач, нужно снять правое переднее колесо и пыльник (защитный щиток) справа. Головка на 17 дюймов проворачивает болт крепления приводного шкива дополнительного оборудования (кондиционера, генератора) и осматривает ремень.При диагностировании различных дефектов и повреждений ремня его необходимо срочно заменить. Замена потребуется также в случае течи масла, неисправности водяного насоса и ролика натяжителя.

На 16-клапанном моторе обрыв ременной передачи приведет к несоответствию углового расположения коленчатого и распределительного валов. В результате поршневая группа будет соприкасаться с клапанами. В результате потребуются ремонтные работы.

Начиная с модели ВАЗ-2108, Волжский автомобильный завод перешел на использование ременной передачи газораспределительного механизма, и продолжает использовать ее на современных моделях, в том числе на Lada Granta.

Этот тип привода имеет ряд преимуществ перед цепным приводом, в том числе:

  • отсутствие необходимости в смазке, благодаря чему имеется возможность вынести привод ГРМ наружу двигателя;
  • бесшумная работа и простой процесс замены.

Но ремень работает намного меньше, чем цепь. Поэтому основой долгой и беспроблемной работы силовой установки является своевременная проверка состояния ремня и его замена.

Периодичность замены

В технической документации производителя указано, что ремень ГРМ на Лада Гранта подлежит замене каждые 60 тысяч километров пробега.

Но тут стоит отметить, что это граничное значение и его лучше заменить до достижения такого пробега, ориентировочно — на 50 тыс. км, но бывают случаи, когда привод требует замены на 40, а то и 30 тыс. км, все зависит от качества ремня и условий его работы.

В любом случае лучше периодически проверять состояние привода (рекомендуется каждые 15 тыс. км) и при обнаружении признаков износа немедленно заменить.

Если этого не сделать, то возможна его поломка, что чревато серьезными последствиями – поршни двигателя сталкиваются с открытыми клапанами, что приводит к их повреждению и последующему дорогостоящему ремонту.

Конструктивные особенности привода различных двигателей

Чтобы понять, как выполняются работы по техническому обслуживанию привода ГРМ, сначала рассмотрим его конструкцию.

Итак, привод газораспределительного механизма осуществляется от коленчатого вала. При этом фазы газораспределения в цилиндрах двигателя имеют 4 такта и выполняются они за два полных оборота коленчатого вала.

Но 2 из этих циклов происходят при закрытых клапанах, поэтому распределительный вал должен обеспечивать только однократное закрытие и открытие клапанов за все 4 такта.

Следовательно, на два оборота коленчатого вала приходится только один оборот распределительного вала. Причем достигается это достаточно просто – за счет разного диаметра шкивов ведущей шестерни.

Ремень имеет зубчатую рабочую поверхность, что исключает проскальзывание на шкивах. Помимо передачи усилия от коленчатого вала, ремень выполняет еще одну функцию – приводит в движение помпу системы охлаждения.

При этом привод должен быть постоянно натянут, чтобы исключить перескакивание зубьев на шкивах, поэтому в его конструкцию включен натяжной ролик.

Это и вся конструкция привода, то есть в него входят только два зубчатых шкива (коленвала и распредвала), шестерня помпы, натяжной ролик и сам ремень.

Все это находится сбоку двигателя, а не внутри. Но чтобы исключить попадание грязи и технических жидкостей, которые могут навредить ремню, все элементы закрыты защитными щитками.

Но это описывает конструкцию 8-клапанного газораспределительного механизма, для привода которого используется только один распределительный вал.

Но некоторые модели Лада Гранта комплектуются двигателями с 16-клапанным механизмом ГРМ и двумя распределительными валами. Но из-за этого конструкция привода почти не меняется.

В отличие от 8-клапанника здесь не один, а распредвалы и соответственно два зубчатых шкива, а в конструкцию добавлен еще один ролик — обводной, он же опорный.На этом все различия закончились.

Проверка состояния и натяжения

Как уже отмечалось, чтобы обрыв ремня не привел к серьезным проблемам, периодически необходимо проверять его состояние и натяжение.

Проверить состояние ремня достаточно просто и вы можете сделать это самостоятельно.

Для этого отвинтить и снять защитные кожухи привода, открутить переднее правое колесо, включить повышающую передачу и повернуть колесо.

Зацепленная шестерня обеспечит вращение коленчатого вала и привод ГРМ через коробку передач.

При вращении внимательно осмотрите ремень. Если на нем замечены какие-либо дефекты или следы износа – сорванные зубья, отслоение резины от ниток, трещины, значительные потертости, то ремень подлежит замене вне зависимости от пробега.

Дополнительно при проверке состояния привода следует также оценивать его натяжение.

Хотя на Гранте и используется ролик с автоматическим натяжением, но рассчитывать на то, что он нормально работает, нельзя, а натяжение лучше проверить, тем более, что выполняется оно очень просто.

Ремень необходимо взять двумя пальцами за середину площадки, противоположной натяжному ролику, то есть на пролете между шкивами вала и повернуть по часовой стрелке.

При этом если даже при значительном усилии его невозможно скрутить на угол больше 90 градусов, значит ремень натянут нормально. Если он закручивается на больший угол, то необходимо отрегулировать его натяжение.

Что потребуется для замены ремня

Итак, для выполнения работ вам потребуется такой инструмент, приспособления:

  1. Набор рожковых и накидных ключей наиболее распространенных размеров;
  2. Набор шестигранников;
  3. Мощная отвертка или монтажная лопатка, монтировка;
  4. Специальный ключ для натяжения натяжного ролика или хотя бы круглогубцы для снятия стопорных колец;
  5. Маркер;
  6. Тряпки.

Естественно понадобится новый ремень соответствующего размера, а также новый ролик натяжителя, так как его необходимо заменить вместе с ремнем. Подготовив все это, можно приступать к разборке.

Разборка

Последовательность работ следующая:

Особенности разборки 16-клапанного мотора

Что касается 16-клапанного двигателя, то разборка последовательно полностью идентична описанной, за исключением одного точка — установка меток.Так как в этом двигателе используется два распредвала, метки нужно совместить на обоих, при этом не забывая про метки на маховике.

Также при разборке помимо натяжного ролика необходимо будет демонтировать и обводной ролик, так как он тоже нуждается в замене.

После снятия ремня необходимо также проверить люфт подшипников на помпе. Если оно значительное, то лучше сразу заменить. В противном случае он может вскоре выйти из строя после замены ремня и необходимости повторной разборки привода, так как помпа меняется только после демонтажа привода.

Обратите внимание, что после снятия ремня важно следить за тем, чтобы случайно не провернуть один из валов при установке нового.

Сборка, проверка

Сборка привода производится в обратной последовательности, но с соблюдением некоторых нюансов. Сначала ставим на место натяжной ролик и наживляем болт его крепления, но не затягиваем.

В 16-клапанном двигателе перед тем, как надеть ремень, оба ролика ставим на место, но в отличие от перепуска натяжения, его можно сразу подтянуть.

Пояс надевается снизу вверх. То есть сначала зубья ремня устанавливаются на зубчатый шкив коленчатого вала, затем он набрасывается на помпу, затем заводится за ролики и только потом надевается на шкив распредвала.

После установки ремень натягивается. Для этого специальный ключ или круглогубцы устанавливают в специальные отверстия наружной обоймы натяжного ролика, после чего поворачивают его по часовой стрелке до совмещения выреза на этой обойме с прямоугольным углублением на внутренней втулке.

Удерживая ролик в этом положении, затягивают болт его крепления.

Закончив затяжку, устанавливаем на место нижний защитный кожух, шайбу и шкив привода генератора. После этого проверяем правильность работы.

Для этого сначала проверяем совпадение всех меток, затем проворачиваем коленвал на несколько оборотов, после чего снова совмещаем все метки. Если они сойдутся, работа по замене выполнена правильно и сборку можно продолжать.Здесь отметим, что на любых отметках допускается небольшое отклонение, но не более пары миллиметров.

При проверке совпадения меток на 16-клапанном двигателе этому действию нужно уделить больше внимания, так как распределительных валов два, и несовпадение меток на любом из них может привести к значительным перебоям в работе двигателя .

Ремень ГРМ на 8-клапанной гранте является связующим звеном между распредвалом и коленвалом. Ремень ГРМ Гранта 8 клапанов выполняет роль гибкого соединения, обеспечивающего тихую работу (железная цепь в старых моторах создавала приличный шум).

Обрыв ремня ГРМ на Гранте сопровождается его постепенным разрушением. Полное разрушение ремня, в момент движения автомобиля, приводит к столкновению поршней с клапанами, в результате чего последние испытывают разного рода повреждения, чаще всего загибаются. Единственный способ избежать повреждения клапанов – досрочно заменить ремень ГРМ, момент которого прописан в сервисной книжке автомобиля.

Двигатели Лада Гранта 11183, в отличие от двигателей других моделей ВАЗ, нуждаются в замене ремня ГРМ каждые 60 тыс. км.Замена ремня при таком пробеге является исключительно рекомендацией производителя автомобиля.

Для достижения максимальной сохранности и целостности механизмов двигателя автомобиля рекомендуется производить замену каждые 40-50 тыс. км. Именно на этом этапе начинают изнашиваться ролики и помпа.

В большинстве случаев обрыв ремня ГРМ происходит не в результате полного износа его конструкции, а именно выхода из строя (клина) роликов или помпы.

В том случае, если все-таки порвался ремень ГРМ Лада Гранта 8 клапанов, для замены необходимо использовать следующие инструменты:

Ключ на «10»;
ключ на «17»; монтажное лезвие
;
специальный ключ для регулировки натяжения ремня ГРМ.

Выполнение работ по замене ремня ГРМ на 8-клапанном двигателе выполняется по приведенной ниже инструкции. Что касается 16-клапанного двигателя, то инструкция практически идентична 8-клапанному.

Подготовка к замене ГРМ

Замена ремня ГРМ на 8-клапанном двигателе начинается непосредственно со снятия клемм с аккумулятора, после чего уже снимаем ремень привода генератора. Для замены ремня необходимо иметь полный доступ к необходимым агрегатным узлам.Для этого доступа необходимо снять правое переднее колесо.

Замене ремня предшествует разборка самого механизма ГРМ, а именно снятие его передней верхней крышки. Почему проводится такое мероприятие? Необходимо установить первый поршень в ВМТ (верхняя мертвая точка).

Регулировка гайки натяжного ролика

Именно соответствующая регулировка натяжного ролика, а точнее использование ремня ГРМ Лада Гранта в фиксированном натяжении, определяет ресурс ремня ГРМ Лада Гранта.

Для демонтажа бывшего в употреблении или порванного ремня ГРМ ослабьте гайку натяжного ролика, в результате чего ремень будет приведен в ослабленное положение. После этого можно переходить к следующему этапу.

Важно: не пытайтесь просто перерезать ремень, чтобы не выкрутить натяжные болты. В этом случае вы не сможете надеть новый ремень на валы.

Шкив привода генератора: отвернуть болт главного шкива генератора

Открутить болт шкива генератора можно обычными ключами, которые были указаны выше в списке необходимых инструментов.Если болт не выходит из шкива генератора, то необходимо выполнить следующие действия:

Снятие заглушки в картере сцепления

Зубья маховика фиксируются монтажной лопаткой, наличие которой обосновывалось перечнем необходимых инструментов.

После выполнения этих действий болт шкива генератора перестанет вращаться, так как коленчатый вал будет зафиксирован монтажной лопаткой.

Снятие шкива генератора

Демонтаж шкива генератора необходимо производить сразу после снятия монтажного лезвия.После демонтажа шкив необходимо положить на чистую поверхность. Мусор в орудии может привести к его заклиниванию.

Демонтаж нижней крышки ГРМ

Процесс демонтажа нижней крышки привода ГРМ осуществляется путем откручивания трех болтов крепления. Такая конструкция имеет место и в моделях двигателей Гранты 21116.

Демонтаж ремня ГРМ

Последний этап — демонтаж ремня ГРМ с последующим определением состояния натяжного ролика.Процесс демонтажа ремня происходит в следующем порядке:

Снятие ремня ГРМ со шкива ГРМ

Снятие ремня с коленчатого вала.

Именно на втором этапе демонтируется ремень ГРМ Гранта вместе с натяжителем. Проводим визуальный осмотр ролика, в частности определяем внешнее состояние и уровень люфта механизма.

В момент сборки нижней крышки ГРМ необходимо отрегулировать натяжение самого ремня.

Причины преждевременного обрыва ремня на Лада Гранта остаются загадкой, в основе которой лежит не только низкое качество используемого в ремне материала, но и низкое качество сборки агрегатных узлов, через которые происходит срабатывание ГРМ. ремень проходит.

Среди других причин преждевременного обрыва ремня ГРМ можно отметить стремление автопроизводителя не отставать от Евро-3/4. Именно желание подогнать автомобиль под эти стандарты и привело к вышеупомянутым негативным моментам в повседневной эксплуатации автомобиля.

Несмотря на заявления производителя о качестве Гранты, ремня ГРМ и пороге его личного пробега в 200 000 тыс. км, он уже рвется на 70 — 80 тыс. км. Хорошая и достойная замена – роликовый ремень Gates.

Именно Лада Гранта от приоры ремень ГРМ подойдет на Лада Гранта и не вызовет преждевременного выхода из строя. Цена ремня ГРМ на Гранте позволяет менять его каждые 50 000 тыс. км, что, в свою очередь, снизит вероятность появления других статей расходов, связанных с ремонтом клапанов двигателя.

Одновременная количественная визуализация живых клеток нескольких биосенсоров на основе FRET

Abstract

Мы разработали новый метод многоцветного спектрального анализа FRET, который используется для изучения системы трех независимых молекулярных сенсоров на основе FRET, состоящих из комбинаций только три флуоресцентных белка. Этот метод стал возможен благодаря новой процедуре вычисления трехмерного спектрального отпечатка возбуждения/излучения FRET на основе эталонных измерений только донора и акцептора.Путем разделения трехмерного спектра образца FRET непосредственно измеряются общие относительные концентрации флуорофоров и их масштабированные эффективности FRET, на основе которых можно вычислить кажущуюся эффективность FRET. Если образец FRET состоит из внутримолекулярных датчиков FRET, можно определить общую относительную концентрацию датчиков, а затем оценить абсолютную эффективность FRET каждого датчика. Используя несколько тандемных конструкций с фиксированной эффективностью FRET, а также датчики кальция на основе FRET с новыми комбинациями флуоресцентных белков, мы демонстрируем, что вычисленная эффективность FRET является точной, а изменения этих величин происходят без перекрестных помех.Мы приводим пример потенциала этого метода, демонстрируя одновременную визуализацию пространственно-колокализованных изменений [Ca 2+ ], [цАМФ] и активности PKA.

Введение

Молекулярные биосенсоры на основе внутримолекулярного FRET стали незаменимыми инструментами для мониторинга пространственной и временной регуляции сигнальных процессов в живой ткани. За последнее десятилетие был разработан и улучшен ряд генетически кодируемых сенсоров на основе FRET, определяющих концентрацию вторичных мессенджеров, состояние фосфорилирования и активность ГТФазы [1].Хотя эти датчики уже доказали свою неоценимую ценность при исследовании отдельных процессов [2], становится все более очевидным, что для лучшего понимания сложных сетей взаимодействия, ответственных за передачу сигнала, необходима возможность одновременного мониторинга активности и пространственной локализации нескольких процессов. требуется [3].

Обычно отдельные процессы исследуются последовательно в ряде измерений из разных выборок, в которых существуют общие «фидуциарные» события [4].Затем информация об отдельных процессах объединяется для построения более широкой картины сигнальной сети. Такие подходы, называемые вычислительным мультиплексированием, применялись для реконструкции пространственно-временных отношений сигнальных событий, измеренных в отношении, например, времени применения лиганда, изменений мембранного потенциала или изменений формы мембраны [5], [6]. Полезные эндогенные фидуциарные события существуют не для всех процессов, а экзогенные события, наложенные на систему, часто нарушают нормальную динамику, которую нужно исследовать.Кроме того, взаимозависимость кажущихся стохастическими событий является интересной особенностью и по своей природе не может быть изучена с помощью мультиплексирования вычислений.

Чтобы устранить ограничения вычислительного мультиплексирования, были достигнуты успехи в экспериментальных измерениях мультиплексирования. В прошлом параллельное использование генетически кодируемых сенсоров на основе FRET было ограничено перекрестным возбуждением и просачиванием излучения доступных флуоресцентных белков, так что количественная оценка FRET без перекрестных помех была серьезной проблемой.Один из подходов к преодолению этого препятствия связан с разработкой новых флуоресцентных белков, обычно с пиками возбуждения и испускания, отделенными от пиков CFP и YFP. Некоторые из них имеют особенно большие стоксовы сдвиги, что позволяет проводить измерения ортогональных длин волн. В сочетании с четырехцветной широкоугольной визуализацией эти подходы позволяют пользователям отслеживать два процесса одновременно [7], [8].

Далее мы представляем новый метод анализа FRET, основанный на линейном разделении трехмерных отпечатков возбуждения/эмиссии.Вычисляя спектральный отпечаток FRET из эталонных измерений, общие относительные концентрации каждого флуорофора и масштабированные эффективности FRET могут быть напрямую отделены от спектра возбуждения/испускания образца FRET без необходимости дополнительных поправок на перекрестные помехи возбуждения и просачивание излучения. . Мы используем этот метод для разделения эффективности FRET трех разных датчиков, каждый из которых состоит из двух из трех разных флуорофоров. Полная полезность этого метода затем демонстрируется одновременной визуализацией пространственно-колокализованных изменений [Ca 2+ ], [цАМФ] и активности PKA.

Результаты

Теория

Этот метод основан на luxFRET, который был разработан для анализа обычных систем с одним донором/одиночным акцептором [9]. В luxFRET излучение флуоресценции измеряется в широком спектральном диапазоне, а вклады флуоресценции донора/акцептора разделяются посредством спектрального разложения. Вместо того, чтобы фильтровать сигнал, чтобы максимизировать специфичность канала излучения к выбранному флуорофору, приветствуется спектральное перекрытие, чтобы максимизировать сбор фотонов, при этом просачивание устраняется за счет линейного разделения.Представленное здесь расширение luxFRET немного отличается от предыдущей реализации не только учетом дополнительных взаимодействующих флуоресцентных частиц, но и подходом к спектральному разложению. В Wlodarczyk et al. 2008 [9] линейное разделение образца FRET было выполнено отдельно при измерениях на двух разных длинах волн возбуждения. Разделение давало кажущиеся концентрации доноров и акцепторов, которые затем использовались для расчета общих концентраций доноров и акцепторов относительно эталонных образцов, а также кажущейся эффективности FRET.Представленный здесь расширенный метод требует тех же эталонных измерений и условий калибровки, что и luxFRET, но использует их для определения спектрального отпечатка FRET между данной парой флуорофоров в трехмерном спектре флуоресценции возбуждения-испускания. Затем можно разделить спектр образца FRET, используя флуорофоры и спектры FRET, и напрямую рассчитать относительные общие концентрации и кажущуюся эффективность FRET.

Начнем с рассмотрения флуоресценции образца, экспрессирующего три независимых внутримолекулярных FRET-сенсора: CFP/YFP-маркированный FRET-сенсор в концентрации [CY] с эффективностью FRET E CY , CFP/RFP-маркированный FRET-сенсор в концентрации [CR] с эффективностью FRET E CR и датчик FRET с маркировкой YFP/RFP в концентрации [YR] с эффективностью FRET E YR .Суммарная флуоресценция представляет собой линейную комбинацию этих членов, так что эмиссия от CFP, YFP и RFP может быть записана как

(1)

(2)

(3)

— относительная интенсивность возбуждения на длине волны 90 633 i 90 634 (т. е. 1∶ 430 нм, 2∶ 500 нм или 3∶ 575 м). представляет спектральную эффективность обнаружения используемого прибора и может различаться в зависимости от длины волны возбуждения, если используются разные фильтры. и — коэффициенты экстинкции донора и акцептора на трех соответствующих длинах волн возбуждения.– квантовые выходы CFP-варианта mTq2 (0,93 [10]), YFP-варианта cpVenus (0,56 [11]) и красного флуоресцентного белка mCherry (0,22 [12]) соответственно; из трех флуоресцентных белков (спектры испускания, нормированные на единицу площади).

Выполняя эталонные измерения каждого из отдельных флуорофоров с теми же настройками, что и при измерении FRET, мы можем количественно определить специфические параметры флуорофора в масштабе эталонной концентрации.Например, флуоресценция, измеренная для образца, экспрессирующего только CFP, может быть записана как

(4)

. Используя эталонные измерения для исключения параметров, специфичных для флуорофоров, мы можем объединить уравнения 1–3, чтобы определить общую флуоресценцию CFP/ Образец YFP/RFP FRET как

(5)

Преобразовывая это уравнение, мы получаем.

(6)

где – калибровочные функции, представляющие относительную возбудимость двух отмеченных флуорофоров на длине волны возбуждения i , отмасштабированные с помощью соответствующего эталонного отношения концентраций [9].Например, для CFP и YFP:

(7)

Первые три члена уравнения 6 (первая строка) представляют флуоресценцию, которая наблюдалась бы при отсутствии FRET. Последние три члена в уравнении 6, которые объединяют функции калибровки с эталонными спектрами, представляют гашение и сенсибилизацию, происходящие при FRET. Например, в случае FRET между CFP и YFP четвертый член вычитает флуоресценцию со спектральными характеристиками CFP, что указывает на тушение донора, при добавлении флуоресценции с характеристиками возбуждения CFP, но характеристиками излучения YFP, что указывает на сенсибилизированное излучение.При рассмотрении уравнений 4 (для YFP) и 7 становится очевидным, что путем умножения на эталонный спектр YFP устраняется и заменяется изменением формы спектра возбуждения на форму спектра CFP. В то время как форма излучения YFP сохраняется, эталонное отношение концентраций, включенное в (уравнение 7), исключается из члена и масштабирует амплитуду излучения по отношению к . панель A иллюстрирует спектральный отпечаток CFP (mTq2), YFP (cpVenus) и RFP (mCherry), рассчитанный и интерполированный на основе спектров одиночного возбуждения и излучения, измеренных на спектрофлуориметре.В то время как панель B представляет собой спектральные отпечатки FRET между CFP-YFP, CFP-RFP и YFP-RFP, рассчитанные на основе измеренных эталонных спектров и калибровочных функций, рассчитанных, как в Wlodarczyk et al 2008 [9]. Путем разделения спектрального отпечатка образца взаимодействующих CFP, YFP и RFP с использованием этих эталонных спектров и вычисленных спектральных отпечатков FRET коэффициенты в уравнении 6, которые представляют общие относительные концентрации CFP, YFP и RFP, а также масштабированный FRET эффективность измеряется напрямую.Затем можно рассчитать кажущуюся эффективность FRET путем деления масштабированной эффективности FRET без смешения на соответствующую общую относительную концентрацию несмешанного вещества, чтобы исключить масштабирование до эталонных концентраций.

Спектральные отпечатки пальцев FRET.

A) Трехмерные эталонные спектры возбуждения/испускания для mTurquoise2 (CFP), cpVenus (YFP) и mCherry (RFP), соответственно слева направо, были построены из отдельных спектров возбуждения и испускания с высоким разрешением. B) Отпечатки эмиссии (трехмерные спектры возбуждения/испускания) FRET были рассчитаны путем вычитания эталонного спектра донора из произведения соответствующей калибровочной функции и эталонного спектра акцептора.Слева направо показаны спектральные характеристики передачи энергии от mTq2 к cpVenus, от mTq2 к mCherry и от cpVenus к mCherry.

В случае, когда каждый вид флуорофора, присутствующий в образце, используется в двух независимых конструкциях, измеренная общая концентрация флуорофора представляет собой сумму концентраций этих сенсоров. Таким образом, измеренная кажущаяся эффективность FRET чувствительна к относительному количеству сенсоров в образце. Чтобы оценить абсолютную эффективность FRET для сравнения значений между образцами с разной относительной экспрессией, необходимо определить относительные концентрации отдельных сенсоров.Выполняя анализ, представленный выше, и вычисляя отношение акцептора к донору для каждого датчика FRET с известной стехиометрией A:D, обычно 1∶1 для большинства датчиков, можно определить соответствующие отношения эталонных концентраций. Например, отношение общей относительной концентрации YFP к общей относительной концентрации CFP, , измеренное для тандемной конструкции 1∶1 CFP/YFP, дает соотношение эталонных концентраций:

(8)

Измеренная общая относительная концентрация данного флуорофора в системе трех сенсоров – сумма концентраций конструктов, в которых он используется.Это позволяет построить систему линейных уравнений:

(9)

Здесь отношения эталонных концентраций, определяемые уравнением 8, необходимы для надлежащего изменения знаменателей (эталонных концентраций) в некоторых терминах, поэтому они могут быть подвел итог. Решение затем для концентрации датчика дает , и . Эти восстановленные данные об изобилии датчиков затем используются для исключения всех факторов, зависящих от концентрации, в масштабированных значениях эффективности FRET, восстановленных из спектрального разложения.

Спектральная визуализация и анализ FRET

Вместо использования спектров возбуждения/испускания с высоким разрешением, как показано на , при применении этого метода к микроскопии необходимо идти на компромиссы. Здесь мы демонстрируем применение этого метода к спектральной визуализации с использованием минимального набора необходимых измерений. Использование только трех длин волн возбуждения и трех фиксированных каналов излучения обеспечивает шесть измерений, которые можно использовать для определения шести величин. Эталонные измерения образцов, экспрессирующих только CFP (mTq2), YFP (cpVenus) и RFP (mCherry) (), а также измерения образца FRET () выполняются с теми же настройками, которые описаны в разделе «Методы».Вкратце, для каждой последовательной длины волны возбуждения (i: 430 нм, 500 нм, 575 мкм) флуоресцентное излучение разделяется на три канала (λ: 455–485 нм, 520–550 нм, 600–670 нм) и регистрируется одновременно в трех квадрантах. одной камеры EMCCD. После разделения и пространственного выравнивания вычтенных фоновых изображений каждого из эталонных образцов были определены области интереса (ROI) и произведено среднее значение флуоресценции. Это привело к трехмерным эталонным спектрам возбуждения/испускания, показанным в верхнем ряду панели B.Эти спектры аналогичны тем, что показаны на рис., только измерены для одиночных ячеек при более низком спектральном разрешении. Затем эти спектры используются вместе с квантовой эффективностью и дискретизированными спектрами, нормированными на единицу, для определения калибровочных функций, как описано в Wlodarczyk et al 2008 [9], с  = [65,19, 0,01, 1,15]  = [135,09, 0,01, 3,9E− 4]  = [2.16, 1.96, 3.4E−4].

Спектральная визуализация и FRET-анализ.

A) Спектральные изображения клеток HeLa, экспрессирующих mTq2, cpVenus и mCherry, представлены соответственно слева направо.Каналы возбуждения 1, 2 и 3 соответствуют 430 нм, 500 нм и 575 нм соответственно, а каналы излучения 1, 2 и 3 соответствуют 455–485 нм, 520–550 нм и 600–670 нм соответственно. . B) Флуоресценция, отобранная из эталонных изображений, используется для создания эталонных спектров, показанных в верхнем ряду для mTq2, cpVenus и mCherry, соответственно, с осями x и y, представляющими каналы возбуждения и испускания. Спектральные отпечатки FRET рассчитываются с использованием соответствующих эталонных спектров и функций калибровки для переноса из mTq2 в cpVenus, mTq2 в mCherry и cpVenus в mCherry, нижний ряд слева направо соответственно. C) Спектральную визуализацию множественных процессов FRET выполняют в клетках HeLa, коэкспрессирующих mTq2-15AA-cpVenus, mTq2-15AA-mCherry и mCherry-15AA-cpVenus. D) Разделение пробы FRET с использованием эталонного образца и спектральных отпечатков FRET напрямую позволяет количественно определить общие относительные концентрации (верхний ряд) и масштабированную эффективность FRET (нижний ряд). E) Кажущаяся эффективность FRET может быть рассчитана путем деления масштабированной эффективности FRET на соответствующую общую относительную концентрацию.Масштабная линейка соответствует 20 мкм.

Для построения спектральных отпечатков FRET для каждой пары флуорофоров эталонный спектр донора вычитается из произведения калибровочной функции и эталонного спектра акцептора (нижняя строка). Затем этот набор эталонных спектров используется для разделения спектров каждого пикселя изображения, измеренного в образце FRET, экспрессирующем конструкции CFP-15AA-YFP, CFP-15AA-RFP и YFP-15AA-RFP FRET (). Линейное разделение приводит к пространственным картам общих относительных концентраций CFP, YFP и RFP, присутствующих в образце, а также к изображениям масштабированной эффективности FRET ().Путем деления масштабированной эффективности FRET на соответствующую общую относительную концентрацию вычисляются изображения кажущейся эффективности FRET ().

Очевидная эффективность FRET зависит от относительного количества доноров, участвующих в данном комплексе FRET, и, таким образом, будет варьироваться от образца к образцу из-за различий в относительной экспрессии конструкций. Чтобы сравнить значения FRET между образцами, необходимо строго контролировать относительное количество датчиков или оценить абсолютную эффективность FRET.Используя уравнение 9 и эталонные отношения концентраций, измеренные из общих относительных концентраций, описанных выше, и уравнения 8, можно количественно определить общие относительные концентрации сенсора. Деление масштабированной эффективности FRET на соответствующую общую относительную концентрацию сенсора устраняет все члены, зависящие от концентрации, и дает оценку абсолютной эффективности FRET.

Чтобы оценить, можно ли надежно оценить три абсолютные эффективности FRET для одного и того же образца, три описанные выше тандемные конструкции были экспрессированы отдельно в наборе образцов, а также вместе в различных комбинациях.Для каждого из сингулярно экспрессирующих образцов достоверно измеряется соответствующая эффективность FRET (). Однако часто в случаях, когда данная конструкция отсутствует в образце, измеренная масштабированная эффективность FRET и общая относительная концентрация малы, но не равны нулю. Деление этих значений может привести к шуму со средним значением, которое часто бывает очень маленьким E<0,05 или очень большим E>>1, но в редких случаях может интерпретироваться как FRET ( E CR и E YR для образца CY).Этот артефакт можно значительно уменьшить за счет пороговой обработки изображения на основе абсолютной интенсивности флуоресценции, а также амплитуды несмешанных величин. иллюстрирует селективную количественную оценку эффективности FRET в образцах, экспрессирующих одиночные конструкции, а также количественную оценку сопоставимой эффективности в образце, экспрессирующем все три конструкции. Образцы, экспрессирующие только тандемную конструкцию CY, измеряли только E CY , равное 0,804+/-0,016 (n = 16). В то время как в образцах, экспрессирующих конструкцию CY в присутствии CR, YR и как CR, так и YR, значение ECY равнялось 0.817+/-0,044 (n = 14), 0,756+/-0,032 (n = 15) и 0,750+/-0,050 (n = 13) соответственно (). Для образцов, экспрессирующих только CR, E CR равнялся 0,409+/-0,034 (n = 11), или в присутствии CY, YR, а также CY и YR, E CR был измерен как 0,417+/-0,013 (n = 14), 0,404+/-0,021 (n = 12), 0,485+/-0,037 (n = 13) соответственно (). Образцы, экспрессирующие только YR, в присутствии CY, CR, а также CY и CR, EYR составляли 0,587+/-0,041 (n = 16), 0,567+/-0,043 (n = 15), 0,532+/-0,036 (n = 15). n = 12) и 0.503+/-0,056 (n = 13) соответственно (). Хотя значения индивидуальной эффективности FRET сопоставимы между образцами, по-видимому, существует небольшая тенденция, приводящая к уменьшению показателя ECY в присутствии YR и CR/YR, усиление ECR в присутствии CY/YR (очевидное в хорошо) и снижение YR в присутствии CR и CY/CR.

Эффективность разделения FRET.

A) Селективная эффективность FRET измеряется в клетках HeLa, селективно экспрессирующих mTq2-15AA-cpVenus, mTq2-15AA-mCherry и mCherry-15AA-cpVenus.Все три эффективности FRET измеряют в клетках HeLa, экспрессирующих все три конструкции. B) FRET от mTq2 до cpVenus точно сообщается в образцах, селективно экспрессирующих конструкцию CY, а также при совместной экспрессии этой конструкции вместе с CR, YR и CR/YR. C) FRET от mTq2 до mCherry точно сообщается в образцах, селективно экспрессирующих конструкцию CR, а также при совместной экспрессии этой конструкции вместе с CY, YR и CY/YR. D) FRET от cpVenus до mCherry точно сообщается в образцах, селективно экспрессирующих конструкцию YR, а также при совместной экспрессии этой конструкции вместе с CY, CR и CY/CR.Изображения затемнены интенсивностью флуоресценции. Столбики погрешностей представляют собой +/- одно стандартное отклонение. Масштабная линейка соответствует 20 мкм.

Измерение выборочных изменений FRET

Часто шум является ограничивающим фактором в полезности измерений FRET. Этот шум возникает как дробовой шум и менее чем благоприятно распространяется при анализе, необходимом для количественной оценки эффективности FRET [13]. Другой источник ошибки возникает из-за неопределенности, создаваемой перекрывающимися спектрами излучения [14]. Хотя эту ошибку можно свести к минимуму путем фильтрации флуоресценции по каналам, которые максимизируют селективность к данным флуорофорам, ранее мы показали, что на самом деле выгодно собирать фотоны из перекрывающихся областей и разделять их посредством линейного разделения [15].В представленном здесь методе ошибка, возникающая из-за перекрытия спектров испускания, усугубляется тем, что мы не только разделяем флуоресценцию флуорофоров с частично перекрывающимися спектрами испускания, но также разделяем флуоресценцию одного и того же флуорофора из двух разных источников. Это приводит к уменьшению амплитуды относительных изменений интенсивности флуоресценции, которые используются для количественной оценки FRET, и увеличению шума.

Чтобы оценить, можно ли надежно измерить изменения в состоянии FRET сенсора в присутствии дополнительных конструкций FRET, флуоресцентные белки сенсора FRET на основе тропонина-C, TN-XXL [16], были заменены различными комбинациями mTq2, cpVenus и mCherry.Когда сенсор, меченный mTq2/cpVenus, обозначаемый теперь как CY-Ca 2+ , экспрессировался вместе с тандемными конструкциями CR и YR в клетках HeLa (), начальный E CY , равный примерно 0,3, был измерен вместе с E . Значения CR и E YR сопоставимы со значениями в . Изображения были получены с 5-секундными интервалами, и после активации сигнального пути Gq путем применения 10 мкМ гистамина через 60 секунд было измерено резкое увеличение E CY .Через 180 секунд E CY уменьшается при вымывании гистамина, а затем насыщается на ~0,7 при применении 10 мкМ иономицина с 5 мМ Ca 2+ через 300 секунд, тогда как E CR и и и и и и и и YR остаются постоянными.

Измерение выборочных изменений FRET.

A) Измерены три эффективности FRET для клеток HeLa, экспрессирующих mTq2-TN-XXL-cpVenus, mTq2-15AA-mCherry и mCherry-15AA-cpVenus. При применении 10 мкМ гистамина через 60 секунд и увеличении E CY (черная кривая) измеряется, в то время как E CR (синяя кривая) и E YR (зеленая кривая) остаются постоянными.Через 180 секунд гистамин вымывается, и E CY возвращается к исходному уровню. Через 300 секунд применяли 10 мкМ иономицина/5 мМ Ca 2+ для насыщения E CY . B) Пространственные карты E CY , E CR и E YR , измеренные для двух клеток HeLa, проиллюстрированы. Темные пятна, окруженные кажущейся высокой эффективностью FRET на изображениях E CY , являются результатом исключения из ядра кальциевого сенсора и низкого уровня флуоресценции в этих областях.Дальнейшая пороговая обработка на основе интенсивности может устранить такие артефакты. C, D) Кривые средней эффективности FRET и пространственные карты показаны для клеток, экспрессирующих mTq2-15AA-cpVenus, mTq2-TN-XXL-mCherry и mCherry-15AA-cpVenus. E,F) Кривые средней эффективности FRET и пространственные карты показаны для клеток, экспрессирующих mTq2-15AA-cpVenus, mTq2-15AA-mCherry и mCherry-TN-XXL-cpVenus. Все кривые и изображения являются репрезентативными для трех или более измерений. Масштабная линейка соответствует 20 мкм.

Аналогичные измерения были выполнены с сенсорами CR-Ca 2+ и YR-Ca 2+ , экспрессированными соответствующими тандемными конструкциями ().Хотя абсолютное изменение эффективности FRET было не таким большим, как для датчика CY-Ca 2+ , эти изменения по-прежнему легко разрешались выше уровня шума. В дополнение к оценке пригодности этого метода для измерения изменений FRET в присутствии нескольких конструкций, эти измерения также указывают на то, что измеренные изменения FRET являются избирательными и что между измеренной эффективностью FRET возникает мало перекрестных помех или они отсутствуют вовсе.

Одновременная количественная оценка трех процессов

Чтобы продемонстрировать весь потенциал этого метода, мы стремились одновременно измерить три отдельных процесса.Флуоресцентные белки сенсора PKA AKAR3 [17] и сенсора цАМФ на основе Epac1 [18] были заменены на mTq2/cpVenus и mTq2/mCherry соответственно. Клетки HeLa котрансфицировали плазмидами, кодирующими CY-PKA, CR-цАМФ и сенсор YR-Ca 2+ , описанный выше (A-B). Аналогично описанному выше протоколу, 10 мкМ гистамина применяли через 60 секунд, и в E YR было измерено резкое увеличение и постоянные колебания в двух из трех клеток, показанных на рис. или E CR (соответствует области интереса 1–3 в соответственно).При активации аденилатциклазы и ингибировании фосфодиэстератов посредством применения 25 мкМ форсколина/100 мкМ IMBX через 300 секунд измеряется постепенное снижение E CR , что указывает на увеличение цАМФ. После короткой задержки также измеряется увеличение E CY , что указывает на активность PKA. Через 540 с раствор для ванны заменяют, чтобы вымыть гистамин, форсколин и IMBX. Осцилляции кальция прекращаются, и E YR падает до исходного значения.Вымывание форсколина и IMBX снижает концентрацию цАМФ, что приводит к увеличению E CR , за которым снова следует соответствующее изменение активности PKA. Через 600 секунд наносят 10 мкМ иономицина с 5 мМ Са 2+ , увеличивая содержание кальция и насыщая эффективность FRET датчика кальция, в то время как уровни цАМФ и ПКА продолжают возвращаться к исходным уровням.

Одновременные измерения [Ca 2+ ], [цАМФ] и активности PKA.

A) Суммарная флуоресценция от всех каналов возбуждения/излучения при первом получении временной серии спектральных изображений трех клеток HeLa, коэкспрессирующих mTq2-AKAR-cpVenus (CY-PKA), mTq2-Epac-mCherry (CR-cAMP), и mCherry-TN-XXL-cpVenus (YR-Ca 2+ ).Указаны три интересующие области, из которых берется флуоресценция для анализа временных рядов. B) Несмешанное пространственное распределение концентраций CY-PKA, CR-цАМФ и YR-Ca 2+ относительно концентрации эталонного образца mTq2, [C ref ], указывает на относительно низкий [CR-цАМФ] и исключение из ядра YR-Ca 2+ . C–E) Три эффективности FRET измеряются для каждой из клеток HeLa посредством отбора проб и последующего анализа необработанной флуоресценции из областей интереса 1–3, указанных на панели A соответственно.При применении 10 мкМ гистамина через 60 секунд и увеличении E YR (зеленая кривая) измеряется, в то время как E CY (черная кривая) и E CR (синяя кривая) остаются постоянными. Через 300 секунд применяли 25 мкМ форсколина/100 мкМ IMBX для повышения [цАМФ], о чем свидетельствует снижение E CR , и активации PKA, о чем свидетельствует увеличение E CY . На 540-й секунде вымывается гистамин/форсколин/IMBX, а на 600-й секунде уровень кальция повышается за счет применения 10 мкМ иономицина в 5 мМ CaCl 2 раствора Рингера. F) Пространственные карты E CY , E CR и E YR , измеренные для трех клеток HeLa, проиллюстрированы. Все кривые и изображения являются репрезентативными для трех или более измерений. Масштабная линейка соответствует 20 мкм.

Обсуждение

Возможность количественной оценки взаимодействия нескольких белков или одновременного измерения нескольких характеристик внутриклеточной среды необходима для дальнейшего прогресса в распутывании сложных сигнальных сетей, управляющих клеточным поведением.Мы представили новый метод трехцветного FRET-анализа, который позволяет именно это. Мы предоставили теоретическую основу, в соответствии с которой можно измерить множественную эффективность FRET. При этом мы демонстрируем возможность количественной оценки эффективности FRET и общих относительных концентраций трех независимых FRET-сенсоров, состоящих из комбинаций только трех разных флуорофоров. Анализ был упрощен по сравнению с аналогичными методами, применяемыми к системам с двумя флуорофорами [9], [19], [20], так что разделение трехмерного спектра возбуждения/испускания образца FRET с тремя флуорофорами дает 6 несмешанных количеств.Три из них представляют общие относительные концентрации. Остальные три величины, разделенные на соответствующую общую относительную концентрацию, представляют кажущуюся эффективность FRET. Путем измерения трех тандемных конструкций с фиксированной эффективностью FRET, выраженных по отдельности и вместе в различных комбинациях, мы продемонстрировали, что этот метод точно определяет эффективность FRET в присутствии нескольких конструкций.

В самом крайнем случае коэкспрессии всех конструкций не только стандартное отклонение в измеренной эффективности FRET немного выше, но и средние значения, по-видимому, указывают на некоторое смещение.Основной проблемой, от которой страдают все методы количественной оценки на основе флуоресценции, является неполная маркировка. В случае генетически закодированных тандемных датчиков FP наличие темных FP из-за проблем с созреванием и фотообесцвечиванием приводит к существованию в образце явно «свободных» флуоресцентных видов. Некоторые оценки функциональной вероятности FP составляют всего 0,80 [21]. Система уравнений, которую мы разработали для определения концентраций сенсора, не учитывает возможность неполной маркировки.Включение явно свободных видов привело бы к недоопределенной системе уравнений. Смещение, наблюдаемое в тройной коэкспрессии, может быть результатом того, что система заставляет флуоресценцию «свободных» видов подчиняться ограничениям фиксированной стехиометрии. Например, mCherry является самым медленным для созревания из используемых флуоресцентных белков и может иметь более низкую функциональную вероятность стационарного состояния. Это может привести к явному свободному mTq2 и cpVenus в образце. Алгоритм предполагает повышенный кажущийся [CY]/[C ref ].С очевидными свободными частицами, не вносящими вклад в FRET, значение несмешанного E CY [CY]/[C ref ] не повлияет, однако при делении первого на второе значение E CY будет занижено. В то время как в образцах, экспрессирующих только конструкцию CR, свободные виды mTq2 могут по-прежнему заставлять систему переоценивать [CR]/[C ref ], что приводит к снижению E CR . При коэкспрессии с другими сенсорами свободные виды могут лучше соответствовать концентрациям других сенсоров, снижая кажущуюся [CR]/[C ref ] и увеличивая предполагаемый E CR .Ни один метод FRET на уровне ансамбля не подвержен влиянию неполной маркировки, и разумно ожидать, что эффекты будут усугубляться по мере увеличения сложности системы. Как и при использовании всех методов количественной флуоресценции, пользователи должны соблюдать осторожность при интерпретации измеренных абсолютных значений.

Чтобы продемонстрировать применение этого метода для динамических измерений внутриклеточных процессов, флуоресцентные белки, используемые в трех популярных датчиках FRET для кальция, цАМФ и ФКА, были заменены различными комбинациями тех же голубых, желтых и красных флуоресцентных белков.Чтобы оценить точность разделения эффективности FRET при наличии динамических изменений FRET, мы провели измерения живых клеток, коэкспрессирующих различные комбинации двух тандемных конструкций с фиксированным FRET вместе с одним датчиком кальция. В этих измерениях эффективность FRET тандемных конструкций с фиксированным FRET остается неизменной с течением времени, в то время как эффективность сенсора кальция модулируется за счет применения к клеткам гистамина и иономицина/кальция и легко разрешается выше шума.Затем мы продемонстрировали полную полезность этого метода путем коэкспрессии трех разных сенсоров в одной и той же клетке и одновременного измерения динамических изменений [Ca 2+ ], [цАМФ] и активности PKA.

Это не первое исследование, в котором FRET измеряется в трехцветной системе. В дополнение к многочисленным исследованиям с использованием трех или более цветов для изучения образования белковых комплексов и конформационных изменений с измерениями одиночных молекул [22]–[25], в других были выполнены спектральные измерения FRET ансамблей флуоресцентных белков, несколько похожие на измерения, представленные здесь [26]. , [27].В первом из этих исследований Гелперин и его коллеги представили «3-FRET» для изучения взаимодействия рецептора эпидермального фактора роста (EGFR) с адаптерным белком Grb2 и тирозиновым фосфопротеином Cbl. Они качественно идентифицировали взаимодействие этих белков, помеченных CFP, YFP и mRFP, путем измерения перекрестных помех и скорректированных на просачивание интенсивностей сенсибилизированной эмиссии (эквивалентно 90 633 нФ 90 634, введенным Youvan et al. 1997 [28]) для каждой пары FRET. Это количество изменится с эффективностью FRET; однако он также будет варьироваться в зависимости от абсолютной концентрации донора и акцептора.Затем авторы приступили к оценке «90 633 E 90 634» из 90 633 нФ 90 634 с использованием 90 633 G-факторов 90 634 для каждой пары FRET, как это было предложено Гордоном и др., 1998 [29]. В этом исследовании представлен дополнительный подход, который включает фотообесцвечивание FP с наибольшим красным смещением, в данном случае mRFP, измерение FRET от донорского дегашения, а затем проведение двухцветного FRET-анализа.

Sun et al. 2010 [27] использовали систему трех FP для исследования взаимодействия димерного фактора транскрипции C/EBPα с белком гетерохроматина 1α (HP1α).Это исследование начинается с представления модели, которая расширяет традиционную модель с одним расстоянием для дополнительного флуорофора, который действует как акцептор как для традиционного донора, так и для акцептора [30], [31]. Затем они выводят набор уравнений для оценки системы, аналогичных тем, которые использовали Гельперин и его коллеги. Точно так же эти уравнения рассматривают взаимозависимость значений FRET при наличии нескольких акцепторов, однако с использованием других обозначений. Оба этих подхода требуют измерений для корректировки перекрестных помех возбуждения и просачивания излучения и основаны на использовании обширных уравнений.Хотя эти уравнения технически несложны для реализации, следовать физическому смыслу терминов и операций не так уж и просто. Кроме того, при исследовании межмолекулярного FRET, как и в обоих этих исследованиях, доля взаимодействующих частиц часто представляет собой изменяющуюся величину, которая не учитывается в модели с одним расстоянием, из которой проводится анализ [32]. Поэтому трудно интерпретировать, чувствительны ли полученные кажущиеся эффективности FRET к свободным донорным или акцепторным молекулам, и в чем именно заключаются различия в эффективности FRET.Хотя представленный здесь метод не направлен на решение проблемы взаимозависимого или межмолекулярного FRET, он, тем не менее, может быть применен к таким исследованиям. Это расширение luxFRET не только проще в применении, поскольку не требует поправок на перекрестные помехи возбуждения или просачивание излучения, но и дает величины с однозначным физическим значением: общие относительные концентрации и кажущуюся эффективность FRET.

Насколько нам известно, это первая реализация количественного спектрального FRET для трехцветной системы, которая измеряет несколько динамических процессов.Однако другие подходы нашли применение при мультиплексировании флуоресцентных измерений сигнальных процессов. Обычно эти методы основаны на сенсорах органического кальция на основе интенсивности в сочетании с логометрическими измерениями FRET генетически кодируемых сенсоров [33]. В качестве альтернативы также были разработаны методы, использующие логометрические измерения FRET двух таких датчиков с ортогональными длинами волн возбуждения/излучения [7], [26]. В одном из наиболее заметных из этих исследований эти два подхода объединяются вместе с субклеточным нацеливанием/анализом для измерения транслокации Ca 2+ , PKC, CaMKII и аннексина A4 [8].Это возможно благодаря использованию датчика кальция Fura Red, мембранно-направленного датчика FRET на основе CFP-YFP PM-CKAR, цитозольного датчика FRET CamKII на основе CFP-YFP и датчика аннексина A4 на основе mOrange-mCherry. В другом примечательном исследовании Ni et al. разработали трехцветный тандемный датчик активности цАМФ и ПКА, ICUEPID [34]. Путем объединения датчика PKA на основе CFP / mCherry от CRY AKAR [35] с молекулярным переключателем и акцепторной молекулой датчика цАМФ на основе Epac, AKAR2 [17].

Какими бы полезными ни были эти методы, возможности для роста в пределах видимого спектра ограничены.Представленный здесь метод позволяет гораздо более эффективно использовать ограниченный спектральный диапазон флуоресцентных белков. Мы продемонстрировали способность контролировать три пространственно-колокализованных процесса с помощью только такого количества типов флуоресцентных белков. Должна быть возможна разработка новых конструкций с дополнительными, возможно, с синим, оранжевым или дальним красным смещением, флуоресцентными белками. Расширение этого метода до четырех флуоресцентных белков позволит одновременно контролировать шесть колокализованных процессов. Пять флуоресцентных белков позволили бы контролировать десять процессов и все равно не использовали бы весь видимый спектр.Особенно в сочетании с возможностью субклеточного молекулярного нацеливания на сенсоры экспериментальное мультиплексирование больше не может быть ограничено ортогональностью флуоресцентных белков или конечным размером видимого спектра, а, скорее, ограничениями экспрессии сенсора и шумом, связанным с измерением и разделением. перекрывающиеся флуоресцентные сигналы. Продолжающаяся разработка ярких и фотостабильных флуоресцентных белков [10], [36], а также разработка сенсоров FRET для увеличения динамического диапазона [37] наверняка помогут решить проблемы, связанные с шумом, и расширят возможности экспериментального мультиплексирования на основе FRET.

Материалы и методы

Процедуры рекомбинантной ДНК

При разработке датчиков FRET и тандемных конструкций использовались mTurquoise2 [10], cpVenus вариант 173 [11] и mCherry [12], но далее они будут обозначаться просто как CFP, YFP и RFP соответственно. Для разработки тандемных конструкций CFP-15AA-YFP, CFP-15AA-RFP и RFP-15AA-YFP CFP и RFP сначала клонировали в вектор Clontech C1 между AgeI и BspEI. Затем последовательность, кодирующую второй флуорофор, вставляли между SalI и BamHI этих векторов, в результате чего две последовательности FP фланкировали оставшийся сайт множественного клонирования.Эти тандемные конструкции использовались для процедур калибровки, а также для создания датчиков. Последовательности, кодирующие функциональные единицы существующих сенсоров кальция, цАМФ и PKA (TN-XXL [16], Epac1(ΔDEP-CD) [18] и AKAR3 [17], [38]), амплифицировали с помощью ПЦР. Функциональные единицы TN-XXL и AKAR3 были вставлены между BspEI и SalI, а Epac1 — между EcoRI и SalI. Все клоны были проверены секвенированием.

Культура адгезивных клеток, трансфекция и визуализация

Клетки HeLa из Американской коллекции типовых культур (ATCC) выращивали в среде Игла, модифицированной Дульбеккосом (DMEM), содержащей 10% фетальной телячьей сыворотки (FCS) и 1% пенициллин/стрептомицин при 37°С. C менее 5% CO 2 .Для временной трансфекции клетки высевали с низкой плотностью на 18-миллиметровые покровные стекла #1,5 (~3×10 5 ) и трансфицировали с использованием реагента Lipofectamine 2000 (Invitrogen) в соответствии с инструкциями производителя. Через три часа после трансфекции среду заменяли и перед измерениями клетки подвергали голоданию в течение ночи. Перед визуализацией клетки дважды промывают раствором Рингера (160 мМ NaCl, 2,5 мМ KCl, 2 мМ CaCl2, 1 MgCl2, 10 мМ HEPES, 8 мМ глюкозы) и помещают в специальную камеру для визуализации.Клетки непрерывно переливают раствором Рингера, подаваемым под действием силы тяжести, перед применением агониста. Обмен раствором осуществляется с помощью шестиканальной системы управления клапаном (Warner Instruments, Hamden CT). Стеки изображений были получены с 5-секундными интервалами с экспозицией 500 мс с возбуждением 430 нм во время возбуждения CFP, с экспозицией 300 мс с возбуждением 500 нм во время возбуждения YFP и с экспозицией 500 мс с экспозицией 575 нм во время возбуждения RFP. Чтобы активировать сигнальный путь Gq и вызвать высвобождение кальция из внутренних запасов, 10 мкМ гистамина (Sigma, St.Louis, Миссури) наносили на клетки. Для активации аденилатциклазы и ингибирования фосфодиэстераз, а также для увеличения концентрации цАМФ и активации РКА к клеткам применяли 25 мкМ форсколина (Sigma, Сент-Луис, Миссури) и 100 мкМ IMBX (Sigma, Сент-Луис, Миссури). Для увеличения внутриклеточного кальция для насыщения реакции сенсоров кальция на клетки наносили 10 мкМ иономицина (Sigma, Сент-Луис, Миссури) в растворе Рингера с 5 мМ CaCl 2 .

Флуоресцентная спектроскопия

Спектры флуоресценции высокого разрешения измеряли с помощью спектрофлуориметра Fluorolog-3 (HORIBA Jobin Yvon, München, Germany).Образцы отслоившихся клеток, экспрессирующих данный флуоресцентный белок, помещали в 10-мм кварцевые кюветы (10×10 мм 2 ) и непрерывно перемешивали магнитной мешалкой. Возбуждение обеспечивалось, и эмиссия собиралась через щели 2 нм. Спектральные вклады из-за рассеяния и клеточной автофлуоресценции измеряли и вычитали из измерений флуоресценции.

Флуоресцентная микроскопия

Все изображения были получены на инвертированном микроскопе Nikon TE2000 (Nikon, Токио, Япония) с 60-кратным иммерсионным объективом (NA 1.2) управляется программным обеспечением Andor Iq (Andor Technology, Белфаст, Великобритания). Возбуждение обеспечивалось с помощью Polychrome IV (Till photonics, Gräfelfing, Германия) при 430 нм для прямого возбуждения mTq2, 500 нм для прямого возбуждения cpVenus и 575 нм для прямого возбуждения mCh с использованием набора трехполосных фильтров CFP/YFP/mCherry ET. (Chroma, Bellows Falls, VT, США). Излучение разделялось с помощью сплиттера изображения Quadview (Photometrics, Тусон, Аризона, США), оснащенного дихроичными зеркалами 510LPXRXT, 560LPXR и 600LPXR (Chroma, Bellows Falls, VT, USA), и проецировалось на камеру iXon Ultra EMCCD (Andor Technology, Белфаст). ,ВЕЛИКОБРИТАНИЯ).

Получение, обработка и анализ изображений

Изображения были получены и экспортированы в виде необработанных 16-битных файлов TIFF с использованием программного обеспечения Andor IQ. Дальнейший анализ был выполнен в Matlab 2011a (Mathworks, Natick, MA). Пространственное выравнивание выполнялось с использованием алгоритма регистрации субпиксельных изображений на основе дискретного преобразования Фурье (DFT) [39]. Для количественной оценки динамики FRET в цитоплазме были выбраны интересующие области размером 15×15 пикселей (приблизительно 50 мкм 2 ), а спектры возбуждения/испускания рассчитаны на основе средней интенсивности флуоресценции стопки изображений для каждой временной точки.Затем определяют общие относительные концентрации и масштабированную эффективность FRET путем неотрицательного линейного разделения спектра образца с эталонным спектром и спектром FRET. Для вычисления пространственных карт общих относительных концентраций и количеств FRET на пиксель линейное разделение и анализ выполнялись после объединения пикселей 2×2.

Общий рабочий процесс набора эталонных измерений, калибровок и измерений образца FRET выглядит следующим образом:

  1. Измерения эталонного образца .Приобретайте спектральные изображения с длиной волны возбуждения i по каналам излучения для образцов, выборочно помеченных отдельными флуоресцентными видами.

    1. Обработка изображения. Для каждого спектрального изображения:

      1. Разделение двойных или четырехракурсных изображений на эмиссионные стеки

      2. Исправление неравномерного поля освещения

      3. Выполнение регистрации изображений всего экс. stack

      4. Измерение фона из определяемой пользователем области интереса и вычитание для каждого изображения

    2. Примеры эталонных изображений. Измерение эталонных спектров.

      1. Измерьте среднее значение флуоресценции из заданной пользователем области интереса для расчета для каждого из эталонных видов.

  2. Вычислить относительные члены возбудимости . Используя приведенные выше эталонные спектры вместе со значениями квантовой эффективности () и нормированными на единицу спектрами излучения, отобранными в точке (), которые можно измерить или оценить по литературным данным, вычислите относительную возбудимость для каждой комбинации донор-акцептор, используя

( 10)

(эквивалентно уравнению 3 из [9]).

  1. Вычислите спектры FRET. Используя соответствующие эталонные спектры и приведенные выше условия относительной возбудимости, вычислите спектры FRET, используя

(11)

  1. Измерение образца FRET. Получите спектральное изображение образца FRET с теми же параметрами, при которых были измерены эталонные образцы. Выполните ту же обработку изображения.

  1. Несмешивание. Используя измеренные эталонные спектры и приведенные выше спектры FRET, выполните линейное разделение выборочных спектров FRET, измеренных в заданной пользователем области интереса или попиксельно для визуализации FRET.При разделении будут возвращены значения, представляющие а) общую относительную концентрацию видов в образце по отношению к соответствующей эталонной концентрации и б) значения, представляющие эффективность FRET, масштабированную по концентрации донорно-акцепторных комплексов по отношению к соответствующей эталонной концентрации донора.

  2. Вычисление кажущейся эффективности FRET . Путем деления масштабированных членов эффективности FRET, полученных в результате разделения, выполненного выше, на соответствующую общую относительную концентрацию концентрации донора или акцептора, можно вычислить кажущуюся эффективность FRET, Ef D и Ef A .

Если известна дополнительная информация о стехиометрии экспрессии флуоресцентных веществ в образце, можно определить оценку абсолютной эффективности FRET (масштабируется по некоторой функциональной вероятности мечения, см. [9]). Для этого требуется дополнительный набор калибровочных измерений.

  • А1. Эталонное измерение известной стехиометрии. Получите спектральные изображения эталонного образца известной стехиометрии (например, тандемной конструкции) с теми же параметрами, при которых были измерены эталонные образцы.Выполните ту же обработку изображения.

  • А2. Количественно определите соотношение эталонных концентраций. Выполните анализ разделения, описанный выше, и рассчитайте общие относительные концентрации. Используйте эти концентрации и известную стехиометрию каждой тандемной конструкции, чтобы вычислить соотношение эталонных концентраций из уравнения 8 для каждой пары донор-акцептор в образце.

  • А3. Определить концентрацию сенсора. Постройте набор линейных уравнений, аналогичных уравнению 9, которые определяют известную или предполагаемую стехиометрию сенсоров в образце.В этом случае, как и в большинстве случаев, стехиометрия каждого сенсора составляет 1∶1, поэтому все коэффициенты равны 1. Используйте эталонные отношения концентраций, где это уместно, чтобы получить общие знаменатели (например, [Y T ]/[Y ref ] = [CY]/[C ref ] * R TC CY +[YR]/[Y ref ], где R TC CY  = [C ref 90] [C ref 90] ]). Решите этот набор уравнений, чтобы определить относительную концентрацию датчика.

  • А4. Расчет оценки эффективности FRET . Путем деления масштабированных показателей эффективности FRET, полученных в результате разделения, выполненного на шаге 5 выше, на соответствующую относительную концентрацию сенсора, можно оценить абсолютную эффективность FRET. Следует отметить, что интерпретацию этих значений все же следует проводить с осторожностью (см. [9]).

8 способов сыграть аккорд Feared F на гитаре от суперлегкого до продвинутого

Аккорд фа мажор — чрезвычайно популярный аккорд на гитаре, но он вызывает всевозможные проблемы у начинающих.Некоторые гитаристы пытаются играть на большом полном барре, что приводит к большому количеству жужжащих нот, а некоторые играют только на супер мини-версии, которая, если играть неправильно, может звучать слабо и тонко.

Как вы можете видеть из (моей довольно хитрой) иллюстрации, аккорд F Major может быть чертовски разочаровывающим аккордом, который заставляет людей хотеть проклинать до небес или заставлять взрослых мужчин и женщин плакать от боли и разбивать свои гитары. в отчаянии.

Ну не бойся товарищ гитарист.В этом посте я покажу вам, как играть аккорд фа мажор в прогрессивной манере, начиная с сложных версий, а затем разбивая их на более простые формы.

Я также покажу вам, как играть необычную инверсию аккорда, которая действительно может повысить уровень вашей игры в определенных ситуациях.

A Некоторое время назад я показал вам несколько способов сыграть сложный аккорд си-минор на гитаре, а совсем недавно — аккорд си-бемоль на гитаре, который также является сложным аккордом. Аккорд фа является более распространенным аккордом, так как он находится в тональности до мажор — одной из клавиш CAGED на гитаре.

Аккорд F также используется в других тональностях, и довольно часто, когда музыкант играет в тональности соль мажор, он заменяет уменьшенный аккорд F # на аккорд фа мажор. Это делает F действительно важным.

Вот несколько песен, в которых используется аккорд F (в большинстве нет каподастра, но в некоторых он есть).

  • Джон Леннон – Представь
  • Оазис – Не оглядывайся в гневе
  • Coldplay – Ученый
  • Дэвид Боуи – Космическая странность
  • Сценарий – Супергерои (капо 3)
  • The Jam — Это развлечение (капо 3)
  • Зов – Куда бы вы ни пошли (капо 2)
  • Сэм Смит – Останься со мной
  • Животные – Дом восходящего солнца

Как играть аккорд F на гитаре

Форма 1 – (Большая страшная буква F)

Это версия F, которую больше всего боятся новички, и я понимаю, почему.Это тяжелый аккорд. Запрет на всех 6 струнах тяжел, особенно на 1-м ладу.

Чтобы хорошо освоить эту версию, вам нужно потратить время на совершенствование качества станка. Это означает использование отличной техники и следование советам из этого поста по барре-аккордам.

Например, насколько он прямой, как близко к ладу и как высоко он расположен, а затем добавляя по одному пальцу, чтобы постепенно завершить аккорд. К счастью, есть гораздо более простые способы играть F.

 

Форма 2 – (С-образный станок)

Это крепкий орешек для многих гитаристов. Здесь вы играете форму аккорда до мажор пальцами 2, 3 и 4 () и играете барре по трем верхним струнам указательным пальцем, помещая этот палец на 5-й лад).

Это определенно роскошная форма, которая подходит для гитаристов среднего уровня, но не идеальна для начинающих.

Почему?

Это потому, что он такой жесткий и не используется во многих песнях (вступление к Red Hot Chili Peppers «Under the Bridge», пожалуй, самый известный пример).

 

Форма 3 – (Форма A)

Наша следующая версия представляет собой барре-аккорд, основанный на форме ля-мажорного аккорда. Вы видите, как мы взяли ля-мажорный аккорд и превратили его в барре-аккорд, а теперь играем его выше грифа?

Мне нравится играть этот аккорд следующим образом. Проблема в том, что всю работу выполняет безымянный палец, поэтому некоторым гитаристам может быть сложно играть.

 

 

Некоторые гитаристы предпочитают играть в эту версию, используя все четыре пальца, как вы можете видеть в версии ниже.

 

 

Мне никогда не нравилась эта вторая версия, так как она корявая, и хотя у меня не самые толстые пальцы в мире (не то, чтобы это было оправданием), играя на 8-м ладу, я изо всех сил пытался подогнать пальцы 2, 3 и 4 в ряд на одном ладу.

Какой бы способ вы ни выбрали для игры в эту версию , она очень удобна. В основном потому, что это более высокая версия фа и, следовательно, предлагает некоторые другие тональные варианты аккорда.

 

Форма 4 – (слегка зачищенная сзади)

Здесь у нас та же версия, что и для формы 1, но на этот раз мы переместили палец барре, так что он затрагивает только две верхние струны (си и высокая ми), в то время как пальцы 2, 3 и 4 по-прежнему ладят те же ноты. . Это полезная версия для практики при создании формы 1.

 

 

Форма 5 (настоятельно рекомендуется)

Эта версия очень похожа на предыдущую, но на немного легче играть, чем на для большинства гитаристов, и звучит почти точно так же.

Мои ученики предпочитают играть этой формой, а не той, по этим причинам. Единственный случай, когда приведенная выше форма лучше, чем эта версия, — это когда вы играете и вам нужно выбрать ноту на высокой струне E (что не так часто, если честно).

 

 

При воспроизведении этой версии убедитесь, что ваш указательный палец, находящийся на струне B, отведен назад на одно касание, чтобы намеренно убить верхнюю струну E, чтобы она не звенела.

Мощный наконечник

Смена фа мажор на до мажор очень распространена в музыке, и с ней многие борются.

Самое замечательное в этой форме то, что переход от C к C также довольно прост.

При переходе от F к C просто оставьте безымянный и указательный пальцы на месте, поднимите мизинец и переместите средний палец на струну D.

Это плавное изменение, если вы попробовали его несколько раз.

 

Форма 6 (мини-штанга)

Наша следующая версия — та, которую обычно преподают, но она не так практична в реальном мире.

Технически, это должно быть проще, чем большинство форм, но в реальном мире это сложный старый аккорд, и он звучит не так хорошо, как , в аккорде нет сильного баса, в отличие от моей любимой формы 5. , Я не большой поклонник этой формы, но это может сработать для вас.

 

 

Форма 7 – (отлично подходит для начинающих)

Это, вероятно, форма, с которой все начинают. Это потому, что он использует всего 3 пальца и вообще нет запрета.

Это хорошая форма для начала, но может быть сложно играть, так как в аккорде всего 3 струны.

Таким образом, вы должны быть осторожны при игре на струнах, чтобы не наиграть нежелательные струны. Я обычно использую его только при игре в песни, для которых требуются только эти струны.

 

 

Если вы знаете эту форму, я бы попытался перейти к форме 5 для большего звучания аккорда.

Дополнительная опция

Форма 8 – (стильная инверсия)

Наша последняя версия немного отличается.Это инверсия аккорда . Инверсия аккорда происходит, когда мы переворачиваем аккорд и делаем басовую ноту любой другой нотой, кроме основной. (Я сделаю урок по этому в будущем).

Я люблю инверсии аккордов.

Это отличный способ добавить изысканности аккорду. Проблема в том, что они не очень хорошо звучат, когда их играют, поэтому изучите эту форму и немного поиграйте на ней — они, как правило, звучат класснее и интереснее, когда их берут медиатором или каким-нибудь классным паттерном игры пальцами.

 

 

Расширения мажорных аккордов фа

Есть много других способов сыграть аккорд фа мажор, и, конечно же, существует множество расширений аккордов, которые можно построить из аккорда фа мажор, например, фа мажор 9, фа7, фадд9, фа sus4 и т. д. далеко находится F Major 7. Самый распространенный способ игры — в приведенной ниже версии.

 

 

Небольшое предупреждение

Будьте осторожны с этим аккордом фа мажор 7.Многие гитаристы играют его вместо аккорда F Major, но дело в том, что F Major 7 — это другой аккорд.

Хотя это очень, очень похоже на фа мажор, нота ми на открытой верхней струне ми придает аккорду другой летний или джазовый (в зависимости от контекста) оттенок.

Поэтому используйте эту фа мажор 7 с умом и, самое главное, поймите, что иногда она будет работать вместо обычной фа, а иногда нет. Не делать различий между ними — маленькая ловушка, которую делают многие новички.

В некоторых из вышеперечисленных фигур используются барре-аккорды. Теперь, если барре-аккорды сложны для вас на данном этапе, изучите более простые версии и проложите свой путь до полных барре-аккордов. (Скоро я официально выпущу свой курс по барре-аккордам, который поможет решить ваши проблемы с барре-аккордами).

 

Изучайте аккорд F!

В качестве сводки, если вы новичок, начните с фигуры 7, а затем продвигайтесь вверх по списку, чтобы в конечном итоге вы могли сыграть их все.

Shape 2 — это роскошь, но я рекомендую вам попробовать, как только вы освоитесь с остальными.

Аккорд F, вероятно, первый аккорд, который действительно доставит много хлопот новичку, поэтому не торопитесь и попробуйте несколько из них. Найдите то, что лучше всего подходит вам и звук, который вам нравится, а затем начните разучивать с его помощью одну из вышеперечисленных песен.

Кроме того, как только вы научитесь играть все эти аккорды, вы должны хорошо научиться переключаться между аккордами.

Чтобы получить дополнительную информацию по этому вопросу, ознакомьтесь с моей книгой или курсом, посвященным этой теме.

Как только вы научитесь играть на всех этих формах, это будет отличным признаком того, что ваша игра на гитаре значительно улучшится.

Не забудьте оставить комментарий и сообщить мне, какой ваш любимый способ играть в F, и не стесняйтесь делиться советами с другими читателями или задавать любые вопросы по этой теме.

Надеюсь, вы уже видели, что этот аккорд можно играть разными способами, и все они подходят для разных уровней мастерства.

(356 888 посещений, 1 459 посещений сегодня)

KBLEE Group – Институт нанобиомедицинских исследований

Добро пожаловать на сайт KBLee Group!

Последние новости

  • Мероприятие T32 Immersion 2022 года пройдет 14–15 января с 10:00 до 18:00.Для получения дополнительной информации, включая ссылку для регистрации, см. вкладку событий .
  • Профессор Ки-Бум Ли стал лауреатом премии Grossman Innovation Prize 2021, поздравляем!
  • Брайан получил премию Рейда 2020 года, поздравляем!
  • Джефф получил премию Ван Дайка 2020 года, поздравляем!
  • Худифа выиграла премию Рейда 2019 года, поздравляем!
  • Крис выиграл премию Рейда 2018 года, поздравляем!
  • Худифа выиграла премию Ван Дайка 2018 года, поздравляем!
  • Топ получил премию Ван Дайка 2018 года, поздравляем!
  • Амин выиграл первую ежегодную премию BME за лидерство, поздравляем!
  • Наша работа над нанокаркасом MnO 2 теперь во многих средствах массовой информации!
    Eurekalert, R&D Magazine, Innovators Magazine, Drug Target Review, The Politico Post, Science Daily, Phys.Org, Innovations Report, Jersey Tribune, News-Medical, Bioengineer, Медицинская лента новостей, (e) Science News, Front Line Genomics, Science Bulletin, BioSpectrum Asia Edition, W3Live News, BioNews Central, Dove Med, Career Biotech, ChemEurope
  • Крис выиграл стипендию Центра исследований спинного мозга в Нью-Джерси, поздравляем!
  • Skylar получает стипендию программы обучения биотехнологии!
  • Худифа, Летао и Исяо выиграли Фонд профессионального развития 2018 года для преподавателей и ассистентов выпускников!
  1. Рукопись Джинхо и Брайана, опубликованная в ACS Nano: «Сверхчувствительное электрохимическое обнаружение мутировавших вирусных РНК с разрешением отдельных нуклеотидов с использованием массива нанопористых электродов (NPEA)», ACS Nano, 2022.
    Это совместная работа с профессором Чон-Ву Чой из Университета Соган.
  2. Рукопись Летао, Топа и Брэндона, опубликованная в ACS Nano: «Прогностическое картирование биофизических сигналов для клеточной дифференцировки и перепрограммирования с использованием комбинаторных наночипов», ACS Nano, 2022.
  3. 1 и рукопись Яннана, опубликованная в Small: «Использование терапевтического потенциала внеклеточных везикул для биомедицинских приложений с использованием многофункциональных магнитных наноматериалов», Small, 2022.
    Это совместная работа с профессором Химин Кан из Корейского университета.
  4. Рукопись Джейсона и Летао опубликована в National Science Review: «3D Nano-Hybrid Stem Cell Gel for Rapid Regeneration Cartilage Regeneration», National Science Review, 2022. Университет.
  5. Рукопись Джинхо Юна, опубликованная в журнале Small Methods: «Биомолекулярный электронный регулятор, состоящий из нанобиогибрида с электрически высвобождаемым комплексом для пространственно-временного контроля дифференцировки нейронов», Small Methods, 2021.
    Это совместная работа с профессором Чон-Ву Чой из Университета Соган.
  6. Рукопись Криса и Летао принята в журнал Science Advances: «Hybrid SMART Spheroids для усовершенствованной заместительной терапии на основе стволовых клеток», Science Advances, 2021 .
  7. Рукопись СангА, Исяо, Криса и Топа опубликована в Advanced Materials: «Bioengineering Approaches for the Advanced Organoid Research», Advanced Materials, 2021 .
  8. Рукопись Джин-Ха Чой, Летао, Брайана и Джинхо Юна, опубликованная в ACS Nano: «CRISPR-Cas12a-опосредованное обнаружение без амплификации мультивирусных ДНК с использованием SERS-активного массива наноцветков оксида графена/треугольника Au». ”, ACS Nano, 2021.
    Это совместная работа с профессором Чон-Ву Чой из Университета Соган.
  9. Наша рукопись опубликована в журнале Small: «Магнитный контроль вертикального положения иерархической наносборки лигандов регулирует дифференцировку стволовых клеток, опосредованную механосенсорным восприятием»», Small, 2021.
    Это совместная работа с профессором Химин Кан из Корейского университета.
  10. Рукопись по сотрудничеству с проф. Heemin Kang Опубликовано в

    6 Расширенные материалы
    : «Пульт дистанционного управления временем регулируемой растяжением лиганда нанокуляционные нанокаты in Situ регулирует циклический Адгезия и дифференцировка стволовых клеток», Advanced Materials , 2021 .
  11. 9002
  12. Рукопись по сотрудничеству с Prof. Heemin Kang принято

    3 Усовершенствованные функциональные материалы : «Удаленный переключение упругого перемещения оформленных наноструктур лиганды контролирует монтажную приливку. макрофагов-хозяев», Расширенный Функциональный Материалы , 2021 .
  13. 1 Сотрудничество с Проф. Li Cai Опубликовано 6 Экспериментальная неврология Экспериментальная неврология : «NKX6 способствует нейрогенезу и ослабляет образование глиального шрама в поврежденном спинном мозге», Экспериментальная неврология , 2021 .

  14. Совместная рукопись с проф.Li Cai Опубликовано в 6 Молекулярная терапия

    7
    : «GSX1 продвигает локомоторное функциональное восстановление после травмы спинного мозга», Молекулярная терапия

    4 , 2021 .
  15. 9002

    1 Рукопись по сотрудничеству с Prof. Mortza Mahmoudi Опубликовано в

    Молекулярная фармацевтика : «Восстановление механизмов эндогенного ремонта для лечения хронических ран с мультисуированной подвязкой , Молекулярная фармацевтика , 2021 .

  16. Рукопись Летао, Брайана и Топа, опубликованная в Advanced Materials: «Effective Modulation of CNS Inhibitor Microvironment with Bio-inspired Hybrid Nanoscaffold-based Therapeutic Interventions», Advanced Materials, 2020 .
  17. Letao, Tae-Hyung, Hyeon-Yeol, Jeff, Jong-Min, Dean, Yannan, and Perry’s Manuscript, опубликованная в Advanced Functional Materials : Конъюгаты для мультимодальной и комбинированной визуализации рака, Терапия «, Усовершенствованные функциональные материалы , 2020.
  18. Совместная рукопись Джеффа, опубликованная в Advanced Materials: «4D Printed Transformable Tube Array for High-eat 3D Cell Culture and Histology», Advanced Materials, 2020 .

    Это сотрудничество с проф. Хоун Ли в Университете Rutgers 9062
  19. Jin-Ha, Letao, а также рукопись Брайана, опубликованные в нано-буквах : «In Situ Обнаружение нейротрансмитников От стволовых клеточных нервных интерфейсов на уровне одного ячейки через графен-гибрид Серс нанобиозность «, нано буквы, 2020 9061

    Manuction Yixiao и Hudifah, опубликованные в ACS Прикладные материалы и интерфейсы : : «NIR-опосредованный спатиопоральный контроль судьбы стволовых клеток с использованием фото-переключения Upconversion Наночастицкая конструкция», ACS прикладных материалов и интерфейсов, 2020 9062 Jin-Ho, Джефф и Обзор Дин Статья опубликована в Nanoscale: «Функциональные наночипы для исследования судьбы и функции стволовых клеток», Nanoscale, 202 0

  20. Рукопись Летао, Джин-Хо, Криса и Яннана, опубликованная в Nano Letters: «Комбинаторный графен-золотогибридный SERS-наночип для двойного усиления обнаружения нейронных генов», Nano Letters, 2019
    6 Обзорная статья Криса принята в Frontiers in Cellular Neuroscience: «Bio-Inspired Nanomaterials for Delivery of Therapeutics to Treatment Loss Hearing», Frontiers in Cellular Neuroscience, 2019
  21. Рукопись Джин-Хо и Джин-Ха опубликована в ACS Nano: «Неразрушающая характеристика нейрогенеза стволовых клеток с помощью обнаружения экзосомальной миРНК на основе магнитоплазмонного наноматериала», ACS Nano, 2019
  22. Рукопись Джейсона и Летао, опубликованная в Biomaterials: «Запрограммированная деградация иерархической наночастицы с окислительно-восстановительной реакцией и светом». для самоактивируемой фотохимической усиленной химодинамической терапии», Биоматериалы, 2019
  23. 9 0633 Совместная рукопись Hyeon-Yeol опубликована в журнале Bioconjugate Chemistry: «Включение дитиолана, содержащего аминокислоту в белок, для конкретного сайта», Bioconjugate Chemistry, 2019
    Это совместная работа с проф.Питер Шульц из Scripps
  24. Рукопись Тэ-Хёна, Хён-Ёла и Ахмета, опубликованная в ACS Applied Materials & Interfaces: «Tumor Homing Reactive Oxygen Species Nanarticle for Enhanced Cancer Therapy», ACS Applied Materials & Interfaces, 2019
  25. 9062
  26. Hudifah, Yixiao и Ник, рукопись Ника, Опубликованные в передовых материалах: «NIR Biosensing Neurotransmitters в стволоном сотовом нейронном интерфейсе с использованием расширенной ядро-оболочки Upconversion Nanoparticles», расширенные материалы, 2019 Совместная рукопись Хён-Ёль опубликована в Nano Letters: «Сконструированные мезенхимальные стволовые клетки/наномедицинские сфероиды как активная платформа доставки лекарств для комбинированной терапии глиобластомы», Nano Letters, 2019
    Это совместная работа с проф.Кам Леонг из Колумбийского университета
  27. Рукопись Чон Мина и Летао, опубликованная в Scientific Reports: «Создание многоклеточных опухолевых сфероидов одинакового размера с использованием гидрогелевых микролунок для расширенного скрининга лекарств», Scientific Reports, 2019
    Это совместная работа с Проф. Бон Гын Чунг, Университет Соган,

Экономисты обеспокоены тем, что итальянские политики обещают отказаться от сокращения пенсий

* Пенсионная реформа помогла успокоить рынки во время долгового кризиса

* Повышение пенсионного возраста по мере увеличения продолжительности жизни

* Правительство освободило некоторые категории

* Народные партии обещают отменить ее после

Гэвин Джонс

РИМ, 29 ноя (Рейтер) — Многие ведущие политики Италии обещают больше денег для пенсионеров после выборов в следующем году, выступая за отмену реформ, которые, по мнению экономистов, стабилизировали финансы страны в разгар еврозоны долговой кризис шесть лет назад.

Италия по-прежнему тратит более 16 процентов своего ВВП на государственные пенсии, что является вторым по величине процентом в Европе после Греции, несмотря на пакет серьезных сокращений, введенных правительством технократов в 2011 году, которые помогли остановить распродажу ее облигаций.

Реформа, названная в честь тогдашнего министра благосостояния Эльзы Форнеро, так и не была полностью принята итальянцами. Он повысил пенсионный возраст и требует дальнейшего поэтапного повышения со временем, а следующее повышение — до 67 лет с 66 лет и 5 месяцев — должно произойти 1 января.1, 2019.

Но политики из правых и противников истеблишмента, которые, как ожидается, окажутся в числе лидеров после выборов в мае следующего года, заявляют, что хотят отменить реформу, заблокировав будущие сокращения и отменив уже проведенные.

Экономисты говорят, что такой шаг может стать катастрофой для государственных финансов. Соотношение долга Италии к ВВП также является вторым по величине в Европейском Союзе после Греции.

«Если они отменят пенсионную реформу, это поставит под сомнение устойчивость пенсионной системы Италии и ее государственных финансов в целом», — сказал Лоренцо Кодоньо, глава LC Macro Advisors и бывший главный экономист итальянского казначейства.

Тито Боэри, глава государственного пенсионного агентства INPS, заявил агентству Рейтер в среду, что чистая эмиграция и падение уровня рождаемости означают, что будет трудно финансировать пенсионную систему в течение следующих 30 лет, даже если действующее законодательство останется нетронутым.

«Я читаю о предложениях партий (по пенсиям), которые будут стоить миллиарды и миллиарды евро, но мы сталкиваемся с очень серьезными проблемами», — сказал он.

Левоцентристское правительство до сих пор сопротивлялось призывам высокопоставленных чиновников правящей Демократической партии (ДП) отменить повышение пенсионного возраста в 2019 году.

Однако под давлением профсоюзов недавно были освобождены 15 категорий работников с «обременительной» работой, начиная от акушерок и воспитателей детских садов и заканчивая уборщиками и водителями грузовиков.

Этого было недостаточно для крупнейшего профсоюза CGIL, который призвал провести день уличных протестов в субботу, и это может быть только предвкушением того, что произойдет после выборов.

«Закон Форнеро — это скандал», — говорит Карла Руокко, видный депутат от Движения пяти звезд, выступающего против истеблишмента, которое лидирует в опросах общественного мнения.«Это удерживает людей на работе против их воли, приводит к старению рабочей силы и затрудняет поиск работы молодым людям».

ДОЛГОВОЕ БРЕМЯ

Лидер антииммигрантской Северной лиги Маттео Сальвини, ключевой член правоцентристской коалиции, которая, похоже, получит большинство мест в парламенте, говорит, что отмена закона Форнеро должна стать «первым действием» следующего правительства.

Закон постепенно повышал пенсионный возраст для женщин до 65 лет в 2018 г. с 60 лет в 2011 г., чтобы привести его в большее соответствие с правилами для мужчин, и впоследствии предписывал регулярное повышение как для мужчин, так и для женщин на основе обновленных оценок ожидаемой продолжительности жизни. .

Также ужесточены требования для досрочного выхода на пенсию, которые теперь рассчитываются на основе количества отработанных лет, а не возраста.

В то время как 5-Star и Лига Севера хотят снизить пенсионный возраст, бывший премьер-министр Сильвио Берлускони, союзник Сальвини по коалиции, пообещал повысить пенсии тем, кто уже вышел на пенсию. 81-летний медиа-магнат пообещал удвоить минимальные пенсии до 1000 евро в месяц, что обойдется как минимум в 4 миллиарда евро (4 доллара США).74 миллиарда) в год.

Политики всех мастей говорят, что пенсионная система в настоящее время достигла долгосрочной устойчивости, хотя некоторые экономисты оспаривают это, говоря, что тенденции демографического и экономического роста более негативны, чем предполагалось в рамках реформы Fornero.

Каковы бы ни были тенденции в долгосрочной перспективе, в ближайшие 10 лет Италия будет продолжать тратить на пенсии гораздо больше, чем большинство ее партнеров, согласно прогнозам Евростата.

Это не только затрудняет сокращение огромного государственного долга страны, но и высасывает ресурсы из других, более продуктивных областей, таких как инвестиции в образование и инфраструктуру.(1 доллар США = 0,8443 евро) (Дополнительный отчет Франчески Писсионери; редактирование Питера Граффа)

PSN Четверг: Бесплатно Qore; Portable Stardust, шутеры на каждый день

Это бесплатный выпуск промо-программы digimag Qore! Но не волнуйтесь, дорогие подписчики, вы все равно получите эксклюзивную демо-версию Flock…

Хорошо, идем дальше. Из других новостей PSN: у нас есть труднопроизносимый шутер Soldner-X: Himmelsstumerrmurmursumthinrathur… но мы предпочитаем менее запутанные — и теперь портативные! — версии Super Stardust Portable и Everyday Shooter для PSP. А кто мог пройти мимо темы «Девушки в нижнем белье»? Это как каталог Victoria’s Secret твоей мамы в — yowzah — 1080p!

Загляните после перерыва, чтобы ознакомиться с полной линейкой игр этой недели, или ознакомьтесь с европейским обновлением на PS3 Fanboy. Мы клянемся, вы найдете что-то купить.

qore

qore



7
Добавить игровой контент

LittlebigPlanet

Age Of Booty
  • Пакет карта 1 (бесплатно)
  • Пакет карт 2 (бесплатно)
  • Пакет карт 3 (бесплатно)
Far Cry 2
GRID
  • Дополнительный контент 8-Ball ($9.99)
Мировое турне Guitar Hero
Karaoke Revolution Presents: American Idol Encore 2
  • Don’t You (Forget About Me) (1,49 доллара США)
  • «Для тебя я буду (1,49 доллара США)»
  • «Друзья в низинах» (1,49 доллара США)
  • «Достучаться до небес» (1,49 доллара США)
  • «Полуночный поезд в Джорджию» (1,49 доллара США)
  • «Ненаписанный (1,49 долл. США)
Наруто: Абсолютный ниндзя
Рок-группа
  • «Реальный мир» — всеамериканские отказы ($0.99)
  • «Готово, готово, вперед!» — Токио Отель ($0,99)
  • «Я не хочу идти в школу» — Naked Brothers (0,99 доллара США)
  • «В наушниках» — Миранда Косгроув (0,99 доллара США)
  • «Hay Poco Rock N Roll» Платеро и Ту (0,99 доллара США)
  • «Тело, которое я занимаю» — Обнаженные братья (0,99 долл. США)
  • «Ты уже мертв?» — Дети Бодома ($0,99)
  • «Tutto E Possibile» — Финли (0,99 долл. США)
  • «Искушение» — Сожмите (0,99 долл. США)
SoulCalibur IV
  • Оборудование для настройки 3 ($1.99)
Игровые видео (бесплатно)
  • Soldner-X: Химмельштурмер Трейлер
  • Принц Персии Дневник разработчиков 2
  • Принц Персии Дневник разработчиков 3
  • Наемники 2 Взорви снова Трейлер
  • Разрушитель лица Видео прослушивания #4
  • Facebreaker Прослушивание #5
  • BAJA: Edge of Control Стартовый трейлер
  • Дикая Луна Трейлер
  • Сопротивление 2 Последние часы
  • Жизнь в LittleBigPlanet: Эпизод 4
  • LittleBigPlanet Добро пожаловать в мой мир Видео
Темы для PS3
  • Тема для девочек в нижнем белье ($1.49)
  • Тема Университета Флориды (1,99 доллара США)
  • Тема европейского нагорья ($1,49)
  • Тема Bloodwork ($1,49)
  • Тема атомной кислоты ($1,49)
  • Тема металлических девушек батальона ($0,99)
Обои для PS3 (бесплатно)
  • Soldner-X: Himmelssturmer Обои 1
  • Soldner-X: Himmelssturmer Обои 2
  • SoulCalibur IV Праздничные обои Hilde
  • SoulCalibur IV Праздничные обои с плющом

PlayStation Store для PSP

Загружаемые игры

Видеоигры (бесплатно)
  • Бен 10: Сила пришельцев Создание трейлера

Все продукты, рекомендованные Engadget, выбираются нашей редакционной группой независимо от нашей материнской компании.Некоторые из наших историй содержат партнерские ссылки.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.